[发明专利]一种非洲鸵鸟源性成分定量检测的双重数字PCR方法

说明书

本发明提供了一种非洲鸵鸟源性成分定量检测的双重数字PCR方法，其采用双通道检测法，利用数字PCR系统同时探测非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因两种荧光信号，将非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因序列检测的探针分别标记为FAM和VIC，通过在同一PCR反应体系中测得的非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因序列的拷贝数，计算得到非洲鸵鸟源性成分占高等动物源性成分的相对含量。本方法可对肉制食品中的非洲鸵鸟源性成分占总肉源性成分的拷贝数比例进行相对定量。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，具体涉及一种对非洲鸵鸟源性成分进行定量检测的双重数字PCR方法。

背景技术

2013年初席卷欧洲的“马肉风波”将食品中动物源性成分掺假推向了风口浪尖，经济利益驱动的食品掺假(economically motivated adulteration,EMA)成为了全球共同面临的食品安全热点问题。肉制食品中含有配料表无标识的肉类成分，特别是含有非食用肉类成分，成为EMA主要类型之一。“马肉风波”中法国、德国、意大利等欧盟16个国家的牛肉产品都含有未经标识的马肉成分。南非官方调查发现一些牛、羊肉制品中包括水牛肉、驴肉，甚至袋鼠肉、长颈鹿肉、斑马肉等。我国在查处“问题羊肉”时也发现掺假羊肉涉及狐狸、水貂、骆驼、老鼠等动物肉。

俗称鸵鸟的动物，包括非洲鸵鸟(Struthio camelus)、澳洲鸵鸟(Dromaiusnovaehollandia)和大美洲鸵(Rhea americana)，在动物分类学上分属不同的科目。其中，非洲鸵鸟是世界广泛养殖的大型肉用禽类，具有很高的经济价值。我国是亚洲目前养殖非洲鸵鸟最多的国家，全国20多个省市均开展了鸵鸟养殖，国家对鸵鸟养殖还设立了征税方面等诸多政策扶持。1996年我国成立了中国鸵鸟养殖开发协会，鸵鸟养殖产业化健康发展。宰杀后的鸵鸟肉用于肉制品加工和出口，收购价格比鸡鸭昂贵，不法企业会以鸡鸭肉伪充鸵鸟肉进行销售和肉制品加工。此外，别名鸸鹋的澳洲鸵鸟在我国也作为一种鸵鸟开展产业化养殖，肉禽养殖和食品加工行业也常常有意或无意中错误地把鸸鹋当做非洲鸵鸟对待，鸵鸟肉中相当比例是鸸鹋肉。

为保障食品安全，维护公平合法贸易，需建立食品中鸵鸟源性成分的定量测定方法，对肉制食品中的鸵鸟源性成分进行精准检测，为执法监管和相关行业自律提供准确可靠的技术依据。

目前，食品中鸵鸟源性成分检测局限于实时荧光PCR、普通PCR、琼脂糖凝胶电泳等分子生物学检测技术，未见能够满足行业需要的定量检测方法。本发明基于这一现实迫切需要研制。

发明内容

本发明的目的在于针对以上要解决的缺点与不足，提供一种非洲鸵鸟源性成分定量检测的双重数字PCR方法，通过同时检测非洲鸵鸟和高等动物源性成分基因组单拷贝的双重数字PCR方法，可对肉制食品中的非洲鸵鸟源性成分占总肉源性成分的拷贝数比例进行相对定量。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种非洲鸵鸟源性成分定量检测的双重数字PCR方法，其采用双通道检测法，利用数字PCR系统同时探测非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因两种荧光信号，将非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因序列检测的探针分别标记为FAM和VIC，通过在同一PCR反应体系中测得的非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因序列的拷贝数，计算得到非洲鸵鸟源性成分占高等动物源性成分的相对含量。

优选地，本发明的方法包括以下步骤：

(1)提取含有非洲鸵鸟源性成分的肉制品的动物组织基因组DNA；

(2)配制数字PCR反应体系；

(3)进行数字PCR反应；

(4)读取和分析数字PCR反应结果；

(5)计算所述非洲鸵鸟源性成分占总肉成分的相对含量