[发明专利]多功能靶向性基因载体及制备方法及用途

权利要求书

1.多功能靶向性基因载体，其特征是用P(LA-co-GA)-PEI-PEG-NLS-G-TAT-G-REDV所示的聚合物表示 ；

其中，P(LA-co-GA)-PEI为聚(丙交酯-co-乙交酯)-聚乙烯亚胺的简称；

PEG为聚乙二醇的简称；

REDV-G-TAT-G-NLS为多肽，所述多肽的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述多功能靶向性基因载体用下述方法制成：

(1)将1,8-辛二醇、LA和GA放入干燥的聚合管中，加入辛酸亚锡作为催化剂，密封；对聚合管抽真空，充氮气，重复8-12次，升温至140-150℃反应24-28小时，得到P(LA-co-GA)粗品；精制，得到P(LA-co-GA)；

LA为丙交酯的简称；

GA为乙交酯的简称；

P(LA-co-GA)为聚(丙交酯-co-乙交酯)的简称；

所述1,8-辛二醇、LA、GA和辛酸亚锡的摩尔比为5：140-560：43-132：1-2；

(2)按摩尔比为1：10-20：10-20的比例，将P(LA-co-GA)、丁二酸酐和二甲氨基吡啶，以及三乙胺溶解在干燥的1，4-二氧六环中，在25-30℃、氮气保护下反应20-25小时，得到溶液1，将溶液1滴加入搅拌下的0-10℃的乙醇中，有沉淀生成；固液分离，固体溶解到三氯甲烷中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤2-3次，稀盐酸洗涤3-4次，饱和氯化钠水溶液洗涤4-5次，向油相中加入无水硫酸钠干燥至恒重，得到端基为羧基的P(LA-co-GA)，所述三乙胺为P(LA-co-GA)质量的1-3倍；

(3)按摩尔比为1：15-30：15-30的比例，将端基为羧基的P(LA-co-GA)、EDC和NHS溶解在DMSO中，室温搅拌1-2小时，加入重均分子量为1800的PEI的DMSO溶液中，使得端基为羧基的P(LA-co-GA)和PEI的摩尔比为1：5-15，室温搅拌反应20-24小时，置于截留分子量为3500-14000的透析袋中，用超纯水透析2-3天，透析液冷冻干燥得P(LA-co-GA)-PEI；

EDC为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的简称；

NHS为N-羧基丁二酰亚胺的简称；

DMSO为二甲基亚砜的简称；

PEI为聚乙烯亚胺的简称；

P(LA-co-GA)-PEI为聚(丙交酯-co-乙交酯)-聚乙烯亚胺的简称；

(4)在氮气保护下，将P(LA-co-GA)-PEI溶解于DMSO中得到溶液2，向溶液2中逐滴滴入OPSS-PEG-NHS的DMSO溶液，在室温、避光条件下，反应2-4小时，加入REDV-G-TAT-G-NLS多肽的DMSO溶液，反应4-8小时，产物置于截留分子量为3500的透析袋中，在超纯水中透析48-72小时，透析液冷冻干燥，得到P(LA-co-GA)-PEI-PEG-NLS-G-TAT-G-REDV多功能靶向性基因载体；

P(LA-co-GA)-PEI，OPSS-PEG-NHS和REDV-G-TAT-G-NLS的摩尔比为1：10-20：10-20；

OPSS-PEG-NHS为邻二硫吡啶聚乙二醇活性酯的简称；

REDV-G-TAT-G-NLS是REDV-G-YGRKKRRQRRR-G-PKKKRKV-C的简称。

2.根据权利要求1所述的多功能靶向性基因载体，其特征是所述聚乙烯亚胺的重均分子量为1800或10000。

3.权利要求1或2所述的多功能靶向性基因载体在制备提高内皮细胞转染效率药物中的应用。