[发明专利]基于POCT模式的CYP3A5*3基因型快速检测试剂盒

权利要求书

1.用于检测CYP3A5*3基因型的荧光定量PCR引物和探针，其特征在于，包括上游引物、下游引物、野生型探针和突变型探针，它们的核苷酸序列分别如下：

上游引物：5’-ATGATGAAGGGTAATGTGGTCCA-3’

下游引物：5’-AACGAATGCTCTACTGTCATTTCTAA-3’

野生型探针：5’-F1-TGTCTTTCAATATCTC-Q-3’

突变型探针：5’-F2-TGTCTTTCAGTATCTC-Q-3’

其中，F1和F2为不同的荧光报告基团，Q为荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针如下：

野生型探针：5’-F1-TGTCTTTCAA⁺T⁺ATCTC-Q-3’

突变型探针：5’-F2-TGTCTTTCAG⁺TATCTC-Q-3’

其中，+表示LNA修饰碱基。

3.含有权利要求1或2所述引物和探针的检测试剂或试剂盒。

4.用于荧光定量PCR检测CYP3A5*3基因型的反应体系，其特征在于，所述反应体系包括权利要求1或2所述引物和探针、DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、反应缓冲液和细胞裂解液；

其中，所述细胞裂解液由十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚组成。

5.根据权利要求4所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系中各组分的终浓度为：0.5-1.5×PCR反应缓冲液、DNA聚合酶0.04-0.1U/μL、dNTPs 0.1-0.5mM、上游引物0.2-0.7μM、下游引物0.2-0.7μM、野生型探针0.2-0.7μM、突变型探针0.2-0.7μM、Mg²⁺1-2.5mM和细胞裂解液；

其中，所述反应体系中十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚的终浓度为0.0005-0.015％w/v和0.001-0.03％w/v。

6.根据权利要求5所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系的总体积为23.5μL，各组分的终浓度或用量为：1.1×PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶1.25U、dNTPs 0.2mM、上游引物0.4μM、下游引物0.4μM、野生型探针0.5μM、突变型探针0.4μM、Mg²⁺2.5mM和细胞裂解液；

所述反应体系中十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚的终浓度为0.005％w/v和0.01％w/v，或0.009％w/v和0.01％w/v，或0.005％w/v和0.02％w/v，或0.005％w/v和0.001％w/v，或0.015％w/v和0.003％w/v；优选0.005％w/v和0.01％w/v。

7.基于POCT模式的CYP3A5*3基因型快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少含有权利要求1或2所述引物和探针以及细胞裂解液；

其中，所述细胞裂解液由十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚组成，且在配制的PCR反应体系中十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚的终浓度为0.0005-0.015％w/v和0.001-0.03％w/v。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、反应缓冲液、标准阳性模板、采样棒、样品收集管中的至少一种。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为热启动Taq DNA聚合酶。

10.根据权利要求7-9任一项所述的试剂盒，其特征在于，与所述试剂盒配套的荧光定量PCR反应程序为：95℃5min；95℃8s，60℃35s，50个循环。