[发明专利]基于POCT模式的CYP3A5*3基因型快速检测试剂盒

说明书

本发明提供一种基于POCT模式的CYP3A5*3基因型快速检测试剂盒，所述试剂盒至少含有用于检测CYP3A5*3(rs776746)基因型的荧光定量PCR引物和探针(SEQ ID NO:1‑4)及细胞裂解液，此外还可包括dNTPs、DNA聚合酶、Mg²⁺、反应缓冲液、标准阳性模板、采样棒、样品收集管等。本试剂盒可实现即时检测，无需DNA提纯，可将样本直接加入试剂中进行PCR反应，特别适合DNA含量较低样本(如口腔脱落细胞)的快速、准确检测，检测准确率达99％以上，检测灵敏度高，可准确检测低至0.125ng基因组DNA；整个检测耗时短，1小时内可得检测结果，能在第一时间给医生提供用药依据，降低患者用药风险。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种基于POCT模式的CYP3A5*3基因型快速检 测试剂盒。

背景技术

CYP3A5是细胞色素P450(CYP)基因超家族成员，主要在肝脏、前列腺、小肠和大肠中表达， 是一种参与外来化合物代谢、胆固醇及类固醇合成的单氧酶。

研究表明，CYP3A5基因的遗传多样性是导致CYP3A5蛋白功能改变的主要原因。CYP3A5基 因存在多个突变位点，其中，命名为CYP3A5*3(6986A>G，rs776746)的单核苷酸突变会导致该 基因在转录为mRNA时被过早剪切，最终形成不完整的蛋白，使其丧失功能。1000 genome project phase 3提供的数据表明，CYP3A5*3等位基因在中国西双版纳傣族人群中出现的频率占68.82％；中 国北京汉族人群中CYP3A5*3等位基因的频率占68.93％；在中国南方汉族人群中CYP3A5*3等位基 因的频率占72.86％。

由于CYP3A5是众多药物在人体中代谢的重要代谢酶，因此携带CYP3A5*3等位基因的患者在 临床药物治疗过程中的表现与野生型等位基因CYP3A5*1携带者大相径庭。例如，用于预防和治 疗器官移植后排异反应的免疫抑制剂他克莫司(tacrolimus,FK506)的代谢就是由CYP3A5编码的 代谢酶完成，从而发挥其免疫抑制作用。

研究表明，携带CYP3A5*3等位基因的患者的血浆FK506浓度远远大于携带CYP3A5*1野生型 等位基因的正常代谢者，导致诸如肾毒性、神经毒性、高血压和胃肠道紊乱等一系列药物毒副作用。 据文献统计，在我国69％～73％的人群面临CYP3A5相关代谢药物的用药风险，因此快速、准确的 CYP3A5基因分型检测对器官移植病人的术后个体化用药有着重大的临床意义。

目前，检测CYP3A5*3的方法主要有测序法、基因芯片法和荧光定量PCR法。

测序法和基因芯片法对检测结果具有很高的精度，其依赖大型精密仪器设备、固定实验室以 及专业操作人员，因此，这两种检测方法成本高，步骤繁琐并且耗时长，在临床上很难进行推广。

虽然降低了测序法和基因芯片法中的仪器和试剂的成本，但其操作复杂，步骤繁多，也不适 用于临床。CN105274221A公开了一种等位基因特异扩增法(ARMS-PCR)，该方法在PCR反应后 需要使用凝胶电泳分析结果。这种开放式的操作很容易导致环境污染，影响结果的准确性，不适合 临床推广。目前常规的检测技术难以满足国内携带CYP3A5*3突变基因的人群对CYP3A5基因检测 快速、准确的要求。

发明内容

本发明的目的是提供一套用于检测CYP3A5*3(rs776746)基因型的荧光定量PCR引物和探针。

本发明的另一目的是提供一种基于POCT模式的CYP3A5*3(rs776746)基因型快速检测试剂 盒。

为了实现本发明目的，本发明提供一套用于检测CYP3A5*3(rs776746)基因型的荧光定量PCR 引物和探针，包括上游引物、下游引物、野生型探针和突变型探针，它们的核苷酸序列分别如下(SEQ ID NO:1-4)：