[发明专利]一种用于2，4，6-三硝基苯酚检测的分子印迹聚合物微球的制备方法

权利要求书

1.一种用于2，4，6-三硝基苯酚检测的分子印迹聚合物微球的制备方法，其特征在于：2，4，6-三硝基苯酚与N，N’-二异丙基碳二酰亚胺反应生成的多硝基酚衍生物具有亮黄色荧光，并且其荧光在酸碱条件下具有开闭特性，所述分子印迹聚合物微球中洗脱位于印迹层中的印迹分子，印迹层内形成具有与印迹分子结构、大小和功能基互补的空穴结构，洗脱印迹分子的聚合物微球具有对目标分析物分子的特异性识别位点，实现对目标分析物分子选择性识别和检测，所述分子印迹聚合物微球的制备过程包括如下四个步骤：

1.1第一步是2，4，6-三硝基苯酚衍生物合成：称取0.4～0.6 g处理后的2，4，6-三硝基苯酚置于100mL三口烧瓶中，随后加入7～8mL二氯甲烷超声分散，再加入0.2～0.4g的N，N’-二异丙基碳二酰亚胺，溶液立即变成红棕色，氮气气氛下搅拌1～3h，由于溶剂二氯甲烷的挥发，溶液变成粘稠状，在30～50℃真空干燥箱中干燥0.5～1.5h得到红棕色固体粉末，具有亮黄色荧光特性，将20mL的沸腾的甲醇溶液倒入上述红棕色固体粉末中，再加入10～20mL蒸馏水，置于0℃冰水混合液中进行水浴1～3h，发现有红棕色晶体析出，将其过滤，即得到所要制备的2，4，6-三硝基苯酚衍生物；

1.2第二步是2，4，6-三硝基苯酚衍生物提纯：把硅胶柱竖直安装在铁架台上，用丙酮和石油醚润洗3遍后，在250mL烧杯中加入150～250g硅胶，用石油醚搅拌均匀，然后将其填充至硅胶柱里，开启气泵，向下对溶液加压，并用洗耳球敲打柱子，使硅胶震荡充实，待硅胶柱子的高度达到分离的要求时，将硅胶柱最上层保持水平，柱子敲实后，再加入石油醚，然后再利用气泵向下加压，如此操作3次，等到石油醚液面和硅胶柱面齐平时，加入少量配制好过柱子的淋洗剂，自然下流，用胶头滴管吸取上述制备的2，4，6-三硝基苯酚衍生物样品，沿着柱壁均匀上样，若样品量过多，用气泵向下加压，再接着上样，待分离样品全部上完后，用气泵将其压至与硅胶柱面齐平，上样结束后，再沿着柱壁加入事先配好爬硅胶板的淋洗剂，最后得到2，4，6-三硝基苯酚衍生物首先被分离出来的是橘红色液体PAD1，其次是黄色液体PAD2，用微量进样器分别取上述橘红色液体和黄色液体5～15μL滴加在硅胶板，确定分离提纯后，将所得到的PAD1和PAD2减压蒸馏，最后在50～70℃下真空烘箱中干燥7～9h，最后分别得到橙黄色和棕黄色固体粉末；

1.3第三步是目标分析物的分子印迹聚合物微球合成：用万分之一的电子天平分别称取20～40mg橙黄色固体粉末，17～19mg的丙烯酰胺，15～25mg的偶氮二异丁腈，置于250mL的锥形瓶中，然后用100mL的量筒量取50mL甲醇与乙腈体积比为9:1的混合液加入到上述锥形瓶中，超声分散5分钟，最后再用微量进样器量取190～210μL的乙二醇二甲基丙烯酸酯滴加到上述锥形瓶的溶液中，通20～30min氮气后，在磨口塞均匀涂上真空脂，盖上锥形瓶，再用保鲜膜包裹，然后将锥形瓶放置于恒温振荡器中，在50～60℃下，振荡反应2～4h，再将温度调至60～70℃下振荡反应8～10h，最后70～85℃下，振荡反应1～3h，取出冷却至室温，把反应混合溶液转移至15mL离心管中，以5000～7000rpm转速离心5～10min，移去上清液，加入洗涤剂继续离心，超声分散、再离心，如此反复操作3次，得到印迹目标分子的分子印迹聚合物微球；

1.4第四步是选择性识别和检测目标分析物的聚合物微球的制备：用乙酸与甲醇体积比为2:8的200mL混合液在索氏提取器中洗脱上述所得到的分子印迹聚合物微球中的模板分子，直至洗脱液中没有荧光信号为止，得到对目标分析物分子选择性识别和光学信号检测的聚合物微球。

2.根据权利要求1所述的一种用于2，4，6－三硝基苯酚检测的分子印迹聚合物微球的制备方法，其特征是：所述酸碱分别是指高氯酸和叔丁醇钾。

3.根据权利要求1所述的一种用于2，4，6－三硝基苯酚检测的分子印迹聚合物微球的制备方法，其特征是：所制备的分子印迹聚合物微球中所用的过柱子的淋洗剂和爬硅胶板的淋洗剂分别是按照乙酸乙酯与石油醚以1:3和1:5的体积比混合而成。

4.根据权利要求1所述的一种用于2，4，6－三硝基苯酚检测的分子印迹聚合物微球的制备方法，其特征是：所制备的分子印迹聚合物微球中所用的洗涤剂是按照去离子水与乙腈以1:1的体积比混合而成。