[发明专利]一种子囊霉素的纯化方法

说明书

本发明公开了一种子囊霉素的纯化方法。将子囊霉素上样液用大孔吸附树脂富集，收集洗脱液并浓缩，在浓缩液中加入萃取剂萃取，并浓缩有机相至干粉；将干粉溶解为澄清的甲醇或乙腈溶液，用制备液相色谱仪制备出高纯度的子囊霉素纯品。本发明的制备工艺对子囊霉素中的关键杂质FK523有很好的去除效果，制备出的产品纯度高。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种子囊霉素的纯化方法。

背景技术

子囊霉素(ascomycin,immunomycin,FK520,式1)为二十三碳的大环内酯类化合物，是二十世纪六十年代从吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus的培养液中分离而得到的一种大环内酯类抗生素，也是免疫抑制剂他克莫司(tacrolimus,FK-506)的乙基类似物，自从他克莫司的免疫抑制活性被发现之后，也迅速推动了子囊霉素免疫抑制活性研究。欧洲专利EP0323865阐述免疫抑制剂子囊霉素的用途，中国专利CN101036649公开了免疫抑制剂子囊霉素在制备治疗自身免疫性糖尿病和皮肤抑制排斥反应的药物中的用途，也有研究表明其在类风湿性关节炎和牛皮癣等方面的治疗也有显著的功效。子囊霉素除了在治疗自身免疫疾病中有非常好的效果，且还具有抗痉挛、抗疟疾、神经保护再生等活性，有巨大的药用价值和市场应用价值。子囊霉素的结构式如下所示：

目前，我国对子囊霉素的研究尚处于起步阶段，大部分研究工作都集中在子囊霉素的菌种选育和发酵、子囊霉素衍生物的合成开发、抗菌活性和临床应用等方面，还较少有提取纯化子囊霉素的报道，其市场也基本被日本和美国等国外公司占领。为打破生产瓶颈，解决我国对于子囊霉素纯品提取纯化技术空洞的缺陷，加快我国自主生产子囊霉素的脚步，如何制备出高纯度的子囊霉素成品成为我们迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种子囊霉素的纯化方法，通过使用大孔吸附树脂和制备液相色谱，得到稳定且纯度高的产品，实现了子囊霉素与关键杂质FK523(式2)的有效分离，包括以下步骤：

a)利用大孔吸附树脂柱富集子囊霉素上样液，用流动相75％-90％(mL/mL)乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩，在浓缩液中加入萃取剂萃取，并浓缩有机相至干粉；

b)将步骤a)所得干粉用配制反相流动相常用的有机溶剂溶解得上柱液，所述干粉与有机溶剂的重量体积比为6～9:100(g/ml)，所述有机溶剂优选甲醇或乙腈，更优选乙腈；将所得上柱液利用制备液相色谱柱分离，以50％～60％(mL/mL)乙腈水溶液为流动相，收集目标组分即为子囊霉素。

在优选的实施方案，所述步骤a)中子囊霉素上样液为子囊霉素粗品经乙醇溶解制得。

在优选的实施方案中，所述步骤a)中大孔吸附树脂选自聚苯乙烯类树脂，优选H-60、HB60、HP20、HP21、SP850、SP207、XAD-1600N或XAD-4，进一步优选XAD-1600N、HP20或SP850，更优选XAD-1600N。

在优选的实施方案中，所述步骤a)中大孔吸附树脂的粒径为0.35mm～0.45mm，特征孔径为形状为球形。

在优选的实施方案中，所述萃取剂选自乙酸丁酯、二氯甲烷、乙酸乙酯、己烷，优选二氯甲烷、乙酸乙酯，更优选乙酸乙酯。

在优选的实施方案中，所述步骤b)中制备液相的制备填料为C₈填料，优选大有C₈填料、华谱C₈填料、Kromasil C₈填料，更优选Kromasil C₈填料。

在优选的实施方案中，所述步骤b)中制备液相色谱柱的制备填料粒径为10μm，孔径为