[发明专利]一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体及制备方法与应用

权利要求书

1.一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

培养幽门螺旋杆菌，提取幽门螺旋杆菌脂多糖；将幽门螺旋杆菌脂多糖和佐剂混合制成抗原，对蛋鸡进行初次免疫和加强免疫，加强免疫共计3～5次；从第一次加强免疫开始，收集鸡蛋，分离，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。

2.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：

所述的幽门螺旋杆菌脂多糖的制备方法，包含如下步骤：

(1)将幽门螺旋杆菌菌苔洗涤后，用水混悬，反复冻融至菌体裂解，得到裂解液；将裂解液与质量分数为90％的苯酚溶液分别预热至67.5～68.5℃后混合，67.5～68.5℃剧烈搅拌30～60min，得到混合液；将混合液冰浴至4℃以下，离心，得到酚相；

(2)步骤(1)制得的酚相加等体积无热原水洗涤，收集水相透析去除苯酚；浓缩；然后加入DNase和RNase酶解，沸水浴使酶失活，冷却后离心，弃沉淀，收集上清，加入丙酮沉淀，得到幽门螺旋杆菌脂多糖。

3.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：

所述的免疫的具体操作为：

选取20周龄产蛋母鸡；初次免疫使用弗氏完全佐剂和幽门螺旋杆菌脂多糖等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射；初次免疫两周后进行第一次加强免疫，使用弗氏不完全佐剂和脂多糖等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫3～5次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋。

4.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：

所述的幽门螺旋杆菌脂多糖的初始浓度为0.5～1mg/mL。

5.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：

所述的分离的具体操作为：

分离所收集的鸡蛋的卵黄，加入无水乙醇脱水，减压干燥得到粗品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体，或者将卵黄进一步纯化，得到成品抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。

6.根据权利要求1所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：

所述的纯化的具体操作为：

(1)用6～9倍卵黄体积的水溶解稀释卵黄，20～40℃搅拌30min～2h，得到溶解液；然后加入硅藻土和0.6～1.3倍溶解液体积的乙醇，调节pH至6.5～7.5，搅拌30min～1h，过滤弃去残渣，得到清液；

(2)向步骤(1)制得的清液中加入硅藻土和1.5～2.5倍溶解液体积的乙醇，调节pH值至5.0～5.4，搅拌30min～1h，过滤弃去上清液，得到固体组分；在固体组分中加入6～9倍固体组分质量的水溶解，20～40℃搅拌30min～2h，过滤弃去残渣，得到清液；

(3)将步骤(2)制得的清液超滤浓缩，干燥，得到抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体。

7.根据权利要求6所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的硅藻土的用量为按溶解液计终浓度5～20g/L。

8.根据权利要求6所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的硅藻土的用量为按溶解液计终浓度5～20g/L。

9.一种抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体，其特征在于通过权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到。

10.权利要求9所述的抗幽门螺旋杆菌脂多糖的卵黄抗体在制备预防或治疗胃溃疡和胃癌产品中的应用。