[发明专利]一种具有生物活性的COX18多肽及其合成方法与用途

说明书

本发明提供了一种具有生物活性的COX18多肽，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：LLPAGWILSH LETYRRPE。本发明同时还提供了利用化学合成的方法‑Fmoc法所合成COX18多肽的方法及用途，用于制备抑制糖诱导的胰岛素的分泌、抵抗胰岛素耐受、抵抗高胰岛素血症和减轻体重的药物中。本发明发现了一个新的多肽COX18是人的细胞色素c氧化酶8A的第52‑69的部分，不同于以前的猪的序列。该序列与此前的序列相比，仅仅从氨基酸来讲就有38.88％的氨基酸不同。况且该序列因为是人源的，故其在用于人体会具有更好的同源性，更少的免疫反应和副作用。

技术领域

本发明提供了一种COX18新多肽以及采用化学合成的方法-Fmoc法合成COX18多肽的工艺，采用该方法所合成的COX18多肽在动物体内体外实验，证明其具有生物活性；并且本发明中还提供了所述COX18多肽的用途，属于生物医药技术领域。

背景技术

短肽COX_52-69是一条含有18个氨基酸的多肽，最初是从猪的小肠中分离纯化出来的，经氨基酸序列比对后发现其与猪细胞色素氧化酶Ⅷ的第52至69完全重叠，所以命名COX_52-69。其序列为LLPAGWVLSH LDSYKKRE。用生化分离纯化得到的COX_52-69多肽做功能实验发现该多肽能够抑制葡萄糖引起的胰岛素的分泌，该发现目前已于2013年10月11日申请中国发明专利，申请号为201310471571.9。在该专利申请中通过从生物组织(猪肠道)中分离纯化获得COX_52-69多肽，但是从生物组织中分离纯化获得COX_52-69多肽是一个高成本的过程。为此需要寻求一种非生化分离的方法以获取有活性的该肽，并能够提高了产量和降低了成本。本申请的申请人针对以上研究于2017年3月29日申报了一项中国发明专利，申请号为201710194719.7，该申请提供了一种通过化学合成方法获得具有生物活性的COX_52-69多肽。然而，上述两项专利中所提供的COX_52-69多肽在性能上仍存在一些需要进一步提高之处。

发明内容

本发明解决了现有技术中的不足，提供了一种具有生物活性的COX18多肽，同时还提供了该COX18多肽的固相合成方法，并且利用化学合成的COX18多肽在动物体内体外实验，均发现COX18多肽有抑制葡萄糖引起的胰岛素分泌的功能、抵抗胰岛素耐受、抵抗高胰岛素血症以及减轻体重的作用。

实现本发明上述目的所采用的技术方案为：

一种具有生物活性的COX18多肽，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：LLPAGWILSH LETYRRPE。该序列是人的细胞色素氧化酶Ⅷ的第52-69的部分，不同于以前的猪的序列。

上述COX18多肽的固相合成方法，包括以下步骤：

(1)、缩合反应：使用DMF预溶胀树脂，滤去溶剂备用；向反应柱中加入脱保护试剂，反应后脱去树脂上的的FMoc保护基团，抽干，继续采用DMF清洗后抽干，并检测；

称取第一个Fmoc-氨基酸Fmoc-GLu(tBu)-OH，同时称取HOBt备用，将二者同时加入反应柱中，并且溶于DCM中，然后加入DIC并搅拌；称取DMAP投入反应柱中；氨基酸与反应试剂一同反应，反应完毕后抽干并用DMF清洗；向反应柱中加入脱保护试剂，反应后，脱去树脂上的的FMoc保护基团，抽干，继续采用DMF清洗后抽干，并检测；

接下来的按照COX18多肽的顺序重复添加肽链上的下一氨基酸，直至整条肽链18个氨基酸全部添加完成并检测通过；全部完成后，使用无水甲醇清洗并使用抽滤瓶将其抽干；

(2)、肽链的切割：在抽干的合成肽树脂中加入切割液，在通风橱中室温搅拌裂解，使用砂芯漏斗过滤除去树脂，收集滤液，滤液经乙醚萃取后放置于干燥瓶内进行干燥，直至其成为白色粉末，即制得多肽粗品；