[发明专利]一种缓解疲劳和抗氧化的牦牛骨蛋白肽及制备方法

权利要求书

1.一种具有缓解疲劳和抗氧化功能的牦牛骨蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将牦牛骨在高温下进行蒸煮，得到牛骨蛋白液；

2)对所述牛骨蛋白液进行超声和动态超高压微射流预处理，改变牛骨蛋白液中牛骨蛋白的组织结构以提高所述蛋白对酶的敏感性，降低酶的使用量；

3)用蛋白酶对预处理后的牛骨蛋白液分步两步进行酶解，得酶解后的蛋白液；

4)用3000道尔顿的超滤膜对所述酶解后的蛋白液进行超滤处理，得含有蛋白肽的溶液；

5)将所述含有蛋白肽的溶液通过凝胶柱进行分离，然后利用反相高效液相色谱将通过所述凝胶柱分离得到的第一个洗脱峰中物质进行分离，收集分离物，即得所述牦牛骨蛋白肽，且所述牦牛骨蛋白肽包含含量为55～62％的、氨基酸序列为Val-Ile-Glu-Ala-Val-Val-Gln-Ser-Val、Asn-Phe-Ile-Lys-Gln-Ser、Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys、Ala-Gly-Glu-Val-Leu的肽；

所述步骤3)中，第一步酶解的过程中所使用的酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的第一复合酶；第二步酶解的过程中所使用的酶为木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的第二复合酶；

所述步骤3)中，碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1～2：1：1；木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为1：1～2。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中酶解的具体条件为：

调节预处理后的牛骨蛋白液中蛋白的含量为6～10％，第一步酶解的过程中，所述第一复合酶的添加量为牛骨蛋白干物质的重量的0.4～1.0％，第二步酶解的过程中，所述第二复合酶的添加量为牛骨蛋白干物质的重量的0.3～0.6％；

第一步酶解为在45～60℃条件下酶解0.5～1.5h，第二步酶解为在45～55℃条件下酶解1.0～2.0h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，对所述牦牛骨进行蒸煮前，将其打碎成骨粒；

所述蒸煮的具体操作为：加入为牛骨颗粒重量1.0～3.0倍的水，在121～131℃条件下处理2～5小时，离心过滤后得滤液，去脂，得到牛骨蛋白液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声预处理的具体条件为，将所述牛骨蛋白液的温度调整至65～75℃，在频率为50～80kH的条件下处理15～25min；

所述超高压微射流预处理的具体操作为，先经过20MPa的均质机预均质处理一次，再在压力140～220Mpa的条件下进行超高压微射流处理2～3次。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的凝胶柱为Sephadex G-15，洗脱峰在280nm进行检测；

步骤5)中反相高效液相色谱分离的具体操作为：流动相流速5～10mL/min；检测波长220nm；

洗脱程序为：流动相A为纯水，流动相B为体积分数0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液；

0～5min流动相B的体积分数为0％，5～40min流动相B的体积分数从0％到35％，40～45min流动相B的体积分数从35％到95％，45～50min流动相B从95％到0％。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，反相高效液相色谱分离的过程中，收集12～14min分离得到的肽溶液。

7.根据权利要求1～6任一项所述方法制备得到的具有缓解疲劳和抗氧化功能的牦牛骨蛋白肽。

8.根据权利要求7所述的具有缓解疲劳和抗氧化功能的牦牛骨蛋白肽在作为食品或保健品中的应用。