[发明专利]一种缓解疲劳和抗氧化的牦牛骨蛋白肽及制备方法

说明书

本发明涉及一种具有缓解疲劳和抗氧化功能的牦牛骨蛋白肽的制备方法及制备得到的蛋白肽，其主要改进点为，对牦牛骨蛋白液进行高频超声波和超高压微射流等预处理，在不添加任何酸和碱的条件下，利用多种复合蛋白酶进行分步酶解，通过膜分离、凝胶分离及反相HPLC分离技术分离得到。本发明的牦牛骨蛋白肽制备方法简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。

技术领域

本发明涉及功能性蛋白加工领域，具体涉及牦牛骨为原料生产的具有缓解疲劳和抗氧化功能的蛋白肽，以及蛋白肽的生产方法。

背景技术

疲劳是机体脑力或体力到达一定阶段时必然出现的一种正常的生理现象。

它是防止机体发生威胁生命的过度机能衰竭所产生的一种保护性反应。抗疲劳肽不仅可以提供人体所必需的氨基酸和能源物质、同时又能够维持机体酶的活性以及内环境的稳定、增强抗氧化能力、防止神经递质失衡等诸多功能特性，抗疲劳肽主要通过增强肌肉力量、提高机体运动耐力，从而迅速消除或延迟疲劳的产生，帮助恢复和增强体力。此外，抗疲劳肽极易被人体快速吸收，无论从吸收速度还是生物学功能上，对于从事体力、脑力、体育运动的人群来说，抗疲劳肽都将成为其重要的功能性食品基料。

目前国内专利中关于蛋白肽的抗氧化、ACE抑制及降血糖功能的专利申请较多，但关于抗疲劳功能蛋白肽专利申请很少。尤其是既具有抗疲劳又具有抗氧化功能的蛋白肽报道很少。以牦牛骨为原料，制备具有抗疲劳和抗氧化功能的蛋白肽的专利文献及相关研究报道还未见到。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗疲劳和抗氧化功能的牦牛骨蛋白肽，所述蛋白肽由如下方法制备得到：

1)将牦牛骨在高温下进行蒸煮，得到牛骨蛋白液；

2)对所述牛骨蛋白液进行超声和动态超高压微射流预处理，改变牛骨蛋白液中牛骨蛋白的组织结构；

3)用蛋白酶对预处理后的牛骨蛋白液分两步进行酶解，得酶解后的蛋白液；

4)用3000道尔顿的超滤膜对所述酶解后的蛋白液进行超滤处理，得含有蛋白肽的溶液；

5)将所述含有蛋白肽的溶液通过凝胶柱进行分离，然后利用反相高效液相色谱将通过所述凝胶柱分离得到的第一个洗脱峰中物质进行分离，收集分离物，即得；

所述步骤3)中，第一步酶解的过程中所使用的酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的复合酶一；第二步酶解的过程中所使用的酶为木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的复合酶二。

本发明针对牦牛骨的原料特点，通过对牦牛骨进行高频超声波、超高压微射流等预处理，在不添加任何酸和碱条件下，利用五种复合蛋白酶进行分步酶解，通过膜分离、凝胶分离及反相HPLC分离技术，开发了具有特定氨基酸多肽序列

(Val-Ile-Glu-Ala-Val-Val-Gln-Ser-Val，Asn-Phe-Ile-Lys-Gln-Ser；

Tyr-Leu-Glu-Glu-Lys，Ala-Gly-Glu-Val-Leu)的抗疲劳和抗氧化功能的牦牛骨蛋白肽，建立一套简单高效的多功能牦牛骨蛋白肽的制备方法。

优选的，所述分离物为分离得到的肽溶液。

优选的，所述步骤3)中，碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1～2：1：1；木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为1：1～2。

优选的，所述步骤3)中酶解的具体条件为：调节预处理后的牛骨蛋白液中蛋白的含量为6～10％，第一步酶解的过程中，所述复合酶一的添加量为牛骨蛋白干物质的重量的0.4～1.0％，第二步酶解的过程中，所述复合酶二的添加量为牛骨蛋白干物质的重量的0.3～0.6％。