[发明专利]水蛭素靶向定位释放基因给药系统及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种水蛭素靶向定位释放基因给药系统，其特征在于，该给药系统为纳米基因给药系统，包括给药载体以及分泌表达质粒，所述分泌表达质粒由真核表达分泌型质粒载体pSecTag2 A和重组水蛭素基因组成，所述重组水蛭素基因是在水蛭素蛋白的编码基因的N端依次连接凝血因子活性形式Xa(FXa)识别序列和精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(RGD)序列，水蛭素蛋白的编码基因的C端依次连接凝血因子活性形式Xa(FXa)识别序列和增强绿色荧光蛋白(EGFP)的编码基因而得到；所述给药载体包裹分泌表达质粒，并且给药载体表面通过RGD肽和PEG进行修饰。

2.根据权利要求1所述的水蛭素靶向定位释放基因给药系统，其特征在于，所述给药载体为聚酰胺-胺型树枝状高分子(PAMAM)

3.根据权利要求2所述的水蛭素靶向定位释放基因给药系统，其特征在于，聚酰胺-胺型树枝状高分子为5代PAMAM。

4.根据权利要求1所述的水蛭素靶向定位释放基因给药系统，其特征在于，所述分泌表达质粒为在真核表达分泌型质粒载体pSecTag2 A的多克隆位点上插入重组水蛭素。

5.根据权利要求1所述的水蛭素靶向定位释放基因给药系统，其特征在于，所述重组水蛭素基因序列为SEQ 1D NO.1。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的一种水蛭素靶向定位释放基因给药系统的制备方法，包括如下步骤：

(1)合成重组水蛭素基因片段，在水蛭素蛋白的编码基因的N端依次连接凝血因子活性形式Xa(FXa)识别序列和精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(RGD)序列，水蛭素蛋白的编码基因的C端依次连接凝血因子活性形式Xa(FXa)识别序列和增强绿色荧光蛋白(EGFP)的编码基因；

(2)构建分泌表达质粒，在真核表达分泌型质粒载体pSecTag2 A的多克隆位点上插入重组水蛭素；

(3)在PAMAM表面用RGD肽和PEG进行修饰，然后包裹步骤(2)得到的分泌表达质粒，最后得到水蛭素靶向定位释放基因给药系统。