[发明专利]一种基于PCR的循环肿瘤细胞的计数方法

权利要求书

1.一种基于PCR的循环肿瘤细胞的计数方法，包括以下步骤：

a) 把细胞样品平均分级成众多的组分，其中超过50%的组分每个组分包含不超过一个循环肿瘤细胞；

b) 从每个组分的细胞中提取核糖核酸并逆转录成cDNA, 和/或提取脱氧核糖核酸；

c) 使用至少一对肿瘤细胞特异性引物用聚合酶链式反应来扩增肿瘤特异性序列；

d) 检测每个组分中扩增的肿瘤特异性序列；并且

e) 通过计数含有肿瘤特异性序列的组分的数量来决定样品中循环肿瘤细胞的数目。

2.根据权利要求1所述的方法，其中每个组分包含不超过一个循环肿瘤细胞。

3.根据权利要求1所述的方法, 其中所述细胞样品经过或者不经过富集循环肿瘤细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中超过50%的组分每个组分包含不超过一个细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中细胞样品是血液或淋巴液样品。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述血液样品去除了红细胞和白细胞。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤特异性序列是核糖核酸转录物，该转录物在肿瘤细胞中比正常血液细胞或淋巴细胞有更高的表达水平，最好在正常血液细胞或淋巴细胞中检测不到。

8.根据权利要求1所述的方法，其中肿瘤特异性引物设计成扩增在一种或多种癌症类型中特异性表达的癌症基因。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述癌症类型选择自乳腺癌，肺癌，肝癌，胰腺癌，前列腺癌，胃癌，肾癌，肠癌，结肠癌和黑素瘤。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤特异性引物设计为扩增与肿瘤转移相关的癌症基因。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞样品被分成超过10、 100、 100、 10,000或是 100,000个以上的组分。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤特异性序列可以用定量PCR或数字PCR方法扩增和检测到。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤特异性序列可以用序列特异性报告探针进行检测。

14.根据权利要求1所述的方法，其中不同癌症类型的肿瘤特异性序列可以用不同报告探针进行检测。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤特异性序列是包含肿瘤特异性突变的基因组脱氧核糖核酸序列。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤特异性序列是在肿瘤细胞中有拷贝数增值的癌症相关基因。

17.一种非诊断/治疗用途的对患者癌症治疗进行预后预测的方法，包括以下步骤：

a）使用权利要求1的方法在癌症治疗期间或之后的不同时间对患者的血液样本或淋巴液样本中的循环肿瘤细胞进行计数; 和

b）使用患者样品中循环肿瘤细胞数量的增加和减少分别作为治疗预后差和预后良好的指标。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述循环肿瘤细胞是表达癌症转移相关基因的肿瘤细胞。