[发明专利]基于双分子荧光互补的新型细胞微丝骨架标记方法在审
| 申请号： | 201810171905.3 | 申请日： | 2018-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN108267435A | 公开（公告）日： | 2018-07-10 |
| 发明（设计）人： | 张宏晨;邵世鹏 | 申请（专利权）人： | 北京大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京万象新悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11360 | 代理人： | 苏爱华 |
| 地址： | 100871*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微丝骨架 活细胞 分子荧光 新型细胞 蛋白 哺乳动物细胞 细胞骨架蛋白 细胞 动态行为 结合短肽 融合蛋白 生命活动 时间观察 细胞运动 荧光背景 支撑作用 高分辨 高稳定 纤维状 亚细胞 分裂 长时 微丝 荧光 病理 成像 发光 应用 侵入 追踪 融合 帮助 | ||
1.一种基于双分子荧光互补的新型细胞微丝骨架标记方法，其特征在于，利用微丝骨架结合短肽LifeAct融合双分子荧光互补的蛋白，从而实现活细胞内无荧光背景的微丝蛋白骨架的稳定标记和长时程成像。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在该融合蛋白不结合纤维状微丝骨架时不发荧光，在其结合纤维状微丝骨架时发出荧光，从而降低成像背景。
3.根据权利要求1和2所述的方法，其特征在于，所使用的体系可以是活细胞，也可以是固定细胞。
4.根据权利要求1和2所述的方法，其特征在于，所使用的双分子荧光互补蛋白，可以是荧光蛋白，也可以是自连接标签。
5.根据权利要求1和2所述的方法，一种基于双分子荧光互补的新形细胞微丝骨架标记方法，其特征在于，所使用的荧光蛋白可以是，分裂的蓝色荧光蛋白，绿色荧光蛋白，黄色荧光蛋白，红色荧光蛋白等。
6.根据权利要求1和2所述的方法，一种基于双分子荧光互补的新形细胞微丝骨架标记方法，其特征在于，所使用的自连接标签可以是HaloTag，SnapTag，ClipTag等。
7.根据权利要求1，2和6所述的方法，使用基于自连接标签的双分子荧光互补的新形细胞微丝骨架标记方法，其特征在于，所使用的荧光染料为小分子透膜染料。
8.根据权利要求1和2所述的方法，一种基于双分子荧光互补的新型细胞微丝骨架标记方法，其特征在于，由以下步骤制备：
先确定自连接肽或荧光蛋白的分裂位点，通过PCR扩增出分裂的两段蛋白，分别融合微丝骨架结合短肽LifeAct，连入具有表达框的载体，构建成质粒，将所构建的质粒转细胞，加入染料(自连接肽)或直接(荧光蛋白)在显微镜下观察细胞微丝骨架的结构和动态。
9.权利要求1-3所述的方法在正常条件下哺乳动物细胞中微丝骨架的标记应用。
10.权利要求1-3所述的方法在病理或者加药条件下哺乳动物细胞中微丝骨架的标记应用。
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