[发明专利]猪副流感病毒5型巢式PCR试剂盒

说明书

本发明涉及一种猪副流感病毒5型巢式PCR试剂盒，包括10×PCR反应缓冲液，Mg²⁺，dNTP，引物和Taq酶，其特征在于：所述的引物为：(1)检测pPIV‑5F基因的外套引物：pPIV‑5‑oF：TCGCCGATTAGTGGATGTAATATA A(SEQ ID No.1)，pPIV‑5‑oR：ATATAGGTCAAATCTAATCCCACAATCT(SEQ ID No.2)；(2)检测pPIV‑5F基因的内套引物：pPIV‑5‑iF：CCC AAG ATG CTA TCA TTG GCT CAA T(SEQ ID No.3)，pPIV‑5‑iR：CTAATTTTTCAAGCACGGCTAC(SEQ ID No.4)。本发明通过巢式PCR方法对pPIV5基因进行检测，提高了检测的灵敏度和特异性，克服了现有的RT‑PCR的弊端，节省了实验经费并且检测结果更加准确。

技术领域

本发明属于动物分子生物学领域，涉及一种猪副流感病毒5型巢式PCR试剂盒。

背景技术

猪副流感病毒5型(porcine parainfluenza virus 5，pPIV-5)属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)，副黏病毒亚科(Paramyxovirinae)，腮腺炎病毒属(Rubulavirus)。pPIV5感染猪可导致咳嗽、流鼻等急性呼吸道症状。该病呈地方性流行，虽然发病率较低、多为隐性感染，但对养猪业潜在的危害巨大。随着pPIV-5感染猪的病例不断在国外报道，加之有研究表明该病毒可以感染人而被所越来越重视，为了应对该病毒感染可能带来的重大经济损失，世界各国都在加紧研制有效的临床诊断技术。国内对该病的研究起步较晚，目前还没有有效的检测方法。目前仅通过临床症状进行诊断，结果不准确，往往因误诊而导致全群动物感染，导致巨大的潜在经济损失；由于pPIV-5在鼻腔分泌物和粪便中含量极少而常规RT-PCR敏感性低易导致漏检，未能准确检测出pPIV-5。针对以上原因，建立一种准确性高、特异性好，灵敏度高的pPIV-5检测方法具有较高的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪副流感病毒5型巢式PCR试剂盒，克服由于pPIV-5在鼻腔分泌物和粪便中含量极少而常规RT-PCR敏感性低易导致漏检，不能准确检测出pPIV-5的问题。

本发明通过以下技术方案来实现：一种猪副流感病毒5型巢式PCR试剂盒，包括10×PCR反应缓冲液，Mg²⁺，dNTP，引物和Taq酶，所述的引物为：

(1)检测pPIV-5F基因的外套引物：

pPIV-5-oF：TCGCCGATTAGTGGATGTAATATAA(SEQ ID No.1)

pPIV-5-oR：ATATAGGTCAAATCTAATCCCACAATCT(SEQ ID No.2)

(2)检测pPIV-5F基因的内套引物：

pPIV-5-iF：CCC AAG ATG CTATCATTG GCT CAAT(SEQ ID No.3)

pPIV-5-iR：CTAATTTTTCAAGCACGGCTAC(SEQ ID No.4)。

进一步的，所述的试剂盒的外套PCR反应体系为cDNA模板3μL，2×permix 12.5μL，10pmol/μL的pPIV-5-oF 1μl，10pmol/μL的pPIV-5-oR 1μL，加ddH₂O至25μL体系。

进一步的，所述的试剂盒的外套PCR反应条件为94℃2min，95℃20s，55℃20s，72℃30s，30个循环，72℃5min。