[发明专利]蝉拟青霉及应用

权利要求书

1.蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)CH113.1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2017年01月04日，保藏编号为CCTCC NO：M 2017004，保藏地址为中国武汉、武汉大学，邮编430072。

2.一种权利要求1所述蝉拟青霉CH113.1在制备抗菌剂中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述抗菌剂为枯草芽孢杆菌抗菌剂、金黄色葡萄糖球菌抗菌剂或大肠杆菌抗菌剂。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述抗菌剂为蝉拟青霉CH113.1经28℃，200rpm发酵培养后的发酵液离心，取上清液a分离纯化获得的。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述上清液a按如下步骤制备：将蝉拟青霉CH113.1接种至斜面培养基，28℃培养5天，获得斜面菌体；所述斜面培养基组成：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂粉10g/L，溶剂为自来水，pH值自然；从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至发酵培养基，28℃，200rpm培养5d，发酵液离心，收集上清液a；所述发酵培养基组成：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，溶剂为自来水，pH值自然。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述上清液a分离纯化方法为：取上清液a，加入3倍体积的无水乙醇，4℃静置过夜后于4℃、12000g离心30min，收集上清液b，旋转蒸发仪蒸干，用无菌水溶解后于4℃缓慢加入硫酸铵，使硫酸铵质量终浓度为60％，静置过夜；4℃、12000g离心30min，分别收集上清液c和沉淀c，上清液c用0.22μm滤膜过滤除菌，获得滤渣a；滤渣a用无菌水溶解后，过0.45μm滤膜，获得滤渣b；滤渣b冻干后用0.050mol/L NaAc-HAc缓冲液溶解并上CM-纤维柱52，以pH 4.0～5.0、0.010～0.10mol/L NaAc-HAc缓冲液平衡柱子，以pH 5.0～5.5、0.10～0.50mol/L NaAc-HAc缓冲液进行梯度洗脱，收集目标组分经分子量截留值为1000Da超滤膜超滤浓缩，获得截留液a并在-50℃冻干后用蒸馏水溶解上Sephadex G-25/G-50柱，洗脱液为pH 6.0～7.0、0.010～0.10mol/L磷酸缓冲液，收集目标组分经分子量截留值为1000Da超滤膜超滤浓缩，获得的截留液b在-50℃冻干后用蒸馏水溶解并上制备型HPLC，含体积浓度0.010％TFA的体积浓度10～80％乙腈水溶液洗脱，收集目标组分在-50℃冻干，于-20℃保存，获得抗菌剂。

7.一种权利要求1所述蝉拟青霉CH113.1在制备益生菌制剂中的应用。

8.一种权利要求1所述蝉拟青霉CH113.1在制备抑菌保鲜膜中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述抑菌保鲜膜按如下步骤制备：将干燥果胶溶解于蒸馏水中，并加入抗菌剂和甘油混合均匀制成膜液，充分搅拌和真空脱气后，倒入模具中铺满铺平，随后置于真空干燥箱中干燥，获得抑菌保鲜膜；所述膜液中果胶和甘油质量含量分别2.5％和3.0％，抗菌剂加入量为0.050mg/mL；所述抗菌剂由蝉拟青霉CH113.1经28℃、200rpm发酵培养后的发酵液离心，取上清液a分离纯化获得的。