[发明专利]一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法

权利要求书

1.一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

（1）设计2对SCAR引物，引物序列如SEQ ID NO.1~4所示，具体如下：

S4-1：5’-GGTGCACTCTCAGTACAATCTGC-3’，

S4-2：5’-CCAGTTCGATGTAACCCACTCG-3’；

S8-1：5’-GATTTTGGGTCCCCGGAATCCCG-3’，

S8-2：5’-GTGGTGACACTCGTCATATAGC-3’；

（2）提取待鉴定烟草基因组DNA，以所提取DNA为模板，利用步骤（1）中的SCAR引物进行PCR扩增，并对PCR扩增产物进行电泳检测分析，据此对待鉴定烟草进行初步分组；

所述待鉴定烟草品种，为如下所述53个烟草品种；

依据利用步骤（1）中2对SCAR引物PCR扩增时特异性条带有无的组合情况，将53个烟草品种分为10、11、00、01四组，其中：0表示未出现特征条带，1表示出现特征条带，具体分组情况如下：

10组：红花大金元、延晒2号、延晒8号、延晒10号、吉烟5号、NC71、翠碧1号；

11组：云烟85、云烟98、云烟203、云烟317、延晒1号、延晒6号、吉烟1号、吉烟7号、吉烟10号、吉烟9号、豫烟10号、龙江911、龙江925、龙江982、K346、SAM、9407；

00组：云烟87、云烟100、云烟105、云烟202、延晒7号、豫烟6号、豫烟7号、豫烟11号、中烟100、龙江981、NC297、CT1410、GR17；

01组：云烟97、云烟99、云烟116、延晒3号、延晒4号、延晒5号、延晒9号、益延1号、延安1号、豫烟12号、中烟206、K326、NC89、NC102、秦烟96、V2；

（3）利用RAPD分子标记技术，对步骤（2）中初步分组后的组内烟草进行分子标记，建立对应的分子ID；具体而言：

对步骤（2）中初步分组后的每个小组的组内烟草进行若干轮RAPD-PCR，并对扩增产物进行电泳检测分析，根据电泳结果对小组内相关品种进行鉴定，最终得到4个小组中不同品种的分子ID；

RAPD-PCR时，具体RAPD引物序列如下：

依据电泳检测结果，分别用“1”、“0”表示步骤（2）中53个烟草品种对应DNA模板在随机RAPD引物扩增结果中表现的特异性谱带的“有”、“无”；

分别按照：S236、1850bp，S236、450bp，S231、500bp，S231、3000bp，S248、1500bp的引物编号与扩增序列长度的对应关系，建立10组的7个烟草品种的分子ID；

分别按照：S251、1000bp，S251、1250bp，S236、150bp，S236、700bp，S236、800bp，S236、1850bp，S246、2150bp，S44、300bp，S44、2000bp，S42、420bp，S231、3000bp的引物编号与扩增序列长度的对应关系，建立11组的17个烟草品种的分子ID；

分别按照：S227、230bp，S227、260bp，S227、300bp，S227、400bp，S227、750bp，S236、230bp，S236、700bp，S236、1850bp，S202、1100bp，S202、1750bp的引物编号与扩增序列长度的对应关系，建立00组的13个烟草品种的分子ID；

分别按照：S236、1850bp，S236、700bp，S236、150bp，S236、800bp，S251、270bp，S251、1100bp，S251、1250bp，S231、500bp，S246、250bp，S42、420bp，S42、2850bp的引物编号与扩增序列长度的对应关系，建立01组的16个烟草品种的分子ID；

按照“总ID=SCAR分组ID +组内RAPD筛选ID”的写法，53个烟草品种的总ID如下：

10组：

11组：

00组：

01组：

。

2.如权利要求1所述利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法，其特征在于，步骤（2）中，提取待鉴定烟草基因组DNA时，利用改良CTAB法进行提取。