[发明专利]一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法

说明书

本发明属于烟草生物技术领域，具体涉及一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法。该方法包括：设计SCAR引物、提取待鉴定烟草基因组DNA、PCR扩增、初步分组、RAPD分子标记、建立对应的分子ID等步骤。本申请以具体的53个烟草品种为例，利用较为成熟的SCAR分子标记和RAPD分子标记技术，建立了特征性的分子ID，可为烟草指纹图谱库的建立奠定良好基础。总体而言，本申请具有鉴定快速、结果准确、重复性较好的技术优势，可为烟草配方中烟草品种的鉴定和烟支质量的稳定鉴定良好基础，能够缓解烟叶品种不真实或品种混杂造成的卷烟配方失真、卷烟品质波动、卷烟风格变化等技术问题，因而具有较好应用价值。

技术领域

本发明属于烟草生物技术领域，具体涉及一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法。

背景技术

烟支制备过程中，卷烟配方原料的稳定是卷烟产品质量稳定的前提。而原料的稳定包括产量及烟草品种的稳定两个方面。现有技术中，针对烟草品种鉴别，主流方法仍然是依据种子形态特征、田间农艺性状和调制后烟叶外观来进行鉴别的。但由于烟支生产涉及烟叶种植、调制、收购、调拨等多个环节，多种因素影响下都可能造成烟叶品种的不真实或品种混杂，进而导致卷烟配方失真，卷烟品质出现波动。而传统的烟草品种鉴别方法又不能实现在上述环节中对烟草品种的准确区分和鉴定。因此，对于烟叶品种间的鉴别问题亟待解决。

就作物品种鉴定而言，随着分子生物学技术的快速发展，利用分子生物标记方法进行品种识别和鉴定已经取得了一些进展。其中在烟草品种鉴定方面，也有一些较好成果。如中国专利《一种鉴别烟草品种的SCAR标记引物及其方法》（2011104084483），即可实现对多个烟草品种的鉴定识别。但该方法也存在一些扩增产物片段较大、鉴定品种较少的缺陷，因而仍有一定改进空间。

发明内容

本申请目的在于提供种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法，从而为烟支质量稳定奠定基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法，该方法具体包括如下步骤：

（1）设计2对SCAR引物（S4-1、S4-2引物对和S8-1、S8-2引物对），引物序列如SEQ IDNO.1~4所示，具体如下：

S4-1：5’-GGTGCACTCTCAGTACAATCTGC-3’，

S4-2：5’-CCAGTTCGATGTAACCCACTCG-3’；

以烟草基因组为模板，应用S4-1、S4-2引物对进行PCR扩增时，PCR扩增产物大小为525bp；

S8-1：5’-GATTTTGGGTCCCCGGAATCCCG-3’，

S8-2：5’-GTGGTGACACTCGTCATATAGC-3’；

以烟草基因组为模板，应用S8-1、S8-2引物对进行PCR扩增时，PCR扩增产物大小为374bp。

（2）提取待鉴定烟草基因组DNA，以所提取DNA为模板，利用步骤（1）中的SCAR引物进行PCR扩增，并对PCR扩增产物进行电泳检测分析，据此对待鉴定烟草进行初步分组；

提取待鉴定烟草基因组DNA时，具体可利用改良CTAB法进行提取；

PCR扩增时，20μL反应体系可参考设计如下：

DNA模板，50ng/μL、0.3~0.7μL；

10×PCR Buffer，1~2μL；

MgCl₂，25mmol/L、0.8~1.6μL；

dNTP，10mmol/L、0.5~2μL；