[发明专利]一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器

说明书

本发明公开了一种蛋白定向固定化修饰的细胞培养容器。本发明首先构建了一种GMCSF与IL4的融合蛋白，以及一种内壁包被有蛋白的细胞培养容器。该细胞培养容器的制备方法为：给蛋白加上His标签；对细胞培养容器的内壁进行硅烷化处理；对细胞培养容器的内壁进行AB‑NTA孵育修饰；加入NiCl₂溶液使AB‑NTA与Ni偶联；加入含有His标签的蛋白，与AB‑NTA中的镍离子进行亲和，使其固定在细胞培养容器的内壁。使用本发明的细胞培养容器培养细胞的过程中，包被的蛋白不会在更换培养液时损失掉，因此无需多次重新加入，也保证了所用蛋白质量的一致性，使得整个培养过程的不可控因素减小，保证细胞培养及分化的效果，同时，具有可逆性、多次利用的优点。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，更具体地，涉及一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器。

背景技术

细胞培养也叫细胞克隆技术，是细胞生物学研究及相关生物制品生产中必不可少的过程。通过对细胞进行基因编辑、药物处理、诱导分化等不同的处理，进行细胞培养可以达到细胞生命过程研究、疾病及药物机理、定向分化为其他细胞等目的，细胞大规模培养还可以用于制备细胞因子、抗体等生物蛋白类药物。细胞培养是生物领域必不可少的技术。

当细胞培养过程中涉及到需要额外添加某种蛋白的时候，往往需要研究人员表达和纯化该蛋白，在每次更换培养基的时候都需加入纯化后的蛋白，经济上花费比较大，实验操作上也比较繁琐。另外，由于蛋白表达纯化后的产品稳定性、蛋白分装和保存时间等问题，都会影响细胞培养以及分化的效果。

树突状细胞，是免疫系统中特异的抗原呈递细胞，能够激活特异抗原的T细胞免疫。2011年的诺贝尔生理学或医学奖被授予了加拿大免疫学家Ralph M.Steinman，以表彰他在获得性免疫中树突细胞及其功能的发现。越来越多的研究表明树突状细胞在自身免疫、癌症、炎症等疾病治疗中发挥重要功能，用树突状细胞治疗疾病具有很好的疗效。但是由于人体树突状细胞较少，占整个血液系统细胞的1％或更少，这让树突状细胞治疗变得艰难，单核细胞在血液系统中占有很大比例，能被诱导分化为树突状细胞，开发相关稳定技术将大大促进树突状细胞在疾病治疗中的应用。近来研究表明，外周血来源的单核细胞GMCSF和IL4处理下能够变成树突状前体细胞，树突状前体细胞在TNF-α、IL-1β、IL6等促炎因子诱导下变为成熟的树突状细胞。在树突状细胞的培养过程中，需要多次进行细胞换液并补加GMCSF和IL4，GMCSF、IL4蛋白的产品稳定性对单核细胞定向分化为树突状前体细胞至关重要，不加IL4而只加GMCSF会使单核细胞向巨噬细胞分化，不能培养出树突状前体细胞。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种将GMCSF和IL4的融合蛋白定向固定于培养容器内壁的培养容器，使得整个诱导单核细胞分化为树突状前体细胞的过程大大简化。

本发明的第一个目的是提供一种融合蛋白。

本发明的第二个目的是提供一种基因。

本发明的第三个目的是提供一种重组载体。

本发明的第四个目的是提供一种重组菌株。

本发明的第五个目的是提供所述融合蛋白、所述基因、所述重组载体、所述菌株在诱导单核细胞分化为树突状前体细胞中的应用。

本发明的第六个目的是提供一种蛋白定向固定化修饰的细胞培养容器。

本发明的第七个目的是提供所述细胞培养容器制备方法。

本发明的第八个目的是提供所述细胞培养容器在细胞培养中的应用。

本发明的第九个目的是提供细胞培养容器在诱导单核细胞分化为树突状前体细胞中的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：