[发明专利]一种神经干细胞球玻璃化冻存/复苏方法有效
| 申请号： | 201810186589.7 | 申请日： | 2018-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN108293980B | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 雷云霆;张国宁;刘喆;夏龙钢 | 申请（专利权）人： | 国源生命科学集团有限公司;山东国源人类遗传资源库管理有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02;C12N5/0797 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250000 山东省济南市高新区大正路1*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 神经 干细胞 玻璃 化冻 复苏 方法 | ||
1.一种神经干细胞球玻璃化冻存及复苏的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）神经干细胞悬浮培养成神经干细胞球；
（2）使步骤（1）的神经干细胞球贴附于细胞球收集片；
（3）将步骤（2）的细胞球收集片于冻存液中孵育；
（4）将步骤（3）的细胞球收集片液氮速冻，然后转入冻存管中于液氮中保存；
（5）将步骤（4）中的细胞球收集片在复苏培养基中孵育复苏，以神经干细胞完全培养基培养后传代，按照正常方式培养、传代；
所述细胞球收集片，包括贴壁面和支架；所述贴壁面为长方形；所述支架与贴壁面的短边垂直相连，呈L型；所述支架高度小于贴壁面长度，使所述贴壁面与水平面呈一定角度；
所述步骤（3）中的冻存液为两种冻存保护剂浓度递增的培养基；步骤（3）为将细胞球收集片在低浓度冻存液中孵育1min，然后在高浓度冻存液中孵育25s。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞球收集片的贴壁面与水平面的角度为15°-30°。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞球收集片的贴壁面的长为10-25mm；宽为3-8mm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞球收集片的贴壁面的长为15-20mm；宽为3.5-5mm。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，细胞球收集片由玻璃或塑料制成。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中神经干细胞球的平均直径为120-180μm。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）的细胞球收集片经贴壁剂包被处理。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（5）中复苏培养基为两种或两种以上冻存保护剂浓度递减的培养基。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤（5）中复苏培养基为三种浓度。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中细胞收集片置于医用液氮中冷冻5-10s。
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