[发明专利]一种具有生物活性的胶原的质量控制方法在审
| 申请号： | 201810189372.1 | 申请日： | 2018-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN108192941A | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 陈鹏;罗思施;李奕恒 | 申请（专利权）人： | 广州创尔生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 宋静娜;郝传鑫 |
| 地址： | 510000 广东省广州市高*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胶原 生物活性 质量控制 透射电镜表征 分子量分布 截留分子量 三螺旋结构 高效提取 国际水平 免疫原性 应用提供 酶反应 酸性酶 透析袋 生产工艺 端肽 筋腱 透析 制备 优化 | ||
1.一种具有生物活性的胶原的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)筋腱预处理：对动物筋腱进行脱脂、切片和消毒处理；
(2)胶原的提取：将经步骤(1)预处理后的筋腱进行粉碎，在粉碎的筋腱中加入0.5～1.0mol/L的乙酸和1000～3000U/L的胃蛋白酶进行酶解，去除端肽，酶解温度为10℃～30℃，酶解反应时间为48～144h，离心后取上清液；
(3)胶原的纯化：将步骤(2)中的上清液进行盐析和沉淀处理，将沉淀再次用0.1～0.5mol/L的乙酸或0.05～0.1mol/L的盐酸酸解，离心取上清液，并进行脱盐处理，得到胶原溶液；
(4)透析：将胶原溶液装入透析袋中，透析袋的截留分子量为50～100kDa，用纯化水或pH 4.5～5.0的醋酸盐缓冲液作为透析外液，透析2～5天，得到所述具有生物活性的胶原原液。
2.根据权利要求1所述胶原的质量控制方法，其特征在于，还包括对所述具有生物活性的胶原原液进行分子量测定、端肽去除检测和三螺旋结构鉴定的步骤。
3.根据权利要求1所述胶原的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(2)中，酶解反应时间为72～120h。
4.根据权利要求1所述胶原的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(2)中，酶解温度为20℃～25℃。
5.根据权利要求1所述胶原的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(2)中，乙酸的浓度为0.8～1.0mol/L。
6.根据权利要求1所述胶原的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(2)中，筋腱：乙酸：胃蛋白酶的质量比为1：1.3～2.8：0.006～0.022。
7.根据权利要求1所述胶原的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(3)中，乙酸的浓度为0.1～0.25mol/L，盐酸的浓度为0.06～0.08mol/L。
8.根据权利要求1所述胶原的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(4)中，透析袋的截留分子量为90～100kDa，透析时间为3天。
9.根据权利要求1所述胶原的质量控制方法，其特征在于，所述筋腱为牛筋腱。
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