[发明专利]蚕蛹蛋白多肽的制备方法

权利要求书

1.蚕蛹蛋白多肽的制备方法，包括蚕蛹粉预处理、蚕蛹蛋白粉酶解、蚕蛹蛋白多肽粗液制备、离子交换树脂层析、凝胶柱层析、高效液相色谱纯化，其特征在于：所述高效液相色谱纯化步骤为：将凝胶层析酶解物溶解，利用高效液相色谱进行纯化，即得蚕蛹蛋白多肽；

所述高效液相色谱纯化步骤中酶解物溶液的浓度为80-100μg/mL，所述色谱条件为：设置进样量为4-6μL，色谱柱为尺寸250mm×4.6mm、粒径5μm的Agilent C18，柱温为25-35℃、流动相为10-15%乙腈溶液、洗脱速度为0.8-1.2mL/min；

所述高效液相色谱纯化步骤中乙腈溶液中含有0.05-0.07%三氟乙酸和0.003-0.005%的薄荷醇；

所述高效液相色谱纯化步骤中高效液相色谱分离填料为改性介孔硅胶，所述改性介孔硅胶中2-巯基-1-甲基咪唑和2-巯基-5-甲基-1,3,4-噻二唑的偶联密度为90-110µmol/g和30-50µmol/g。

2.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述蚕蛹粉预处理步骤为：按料液比为1:5-8g/mL向蚕蛹粉中加入体积比为1:1-2的正己烷和石油醚混合液，加热回流4-5h，即得蚕蛹蛋白。

3.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述蚕蛹蛋白粉酶解步骤为：按料液比为1:20-25g/m向蚕蛹蛋白粉中加入蒸馏水，混合均匀，调节pH至7.5-8.5，然后加入碱性蛋白酶和中性蛋白酶，随后在50-60℃下酶解5-7h，然后将温度升至90-100℃，保温10-20min进行灭酶，冷却后在温度为1-5℃、转速为8000-10000rpm的离心机中离心8-10min，上清液浓缩至浓度为45-55mg/mL的溶液，即为蚕蛹蛋白多肽粗液。

4. 根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述离子交换树脂层析步骤为：将蚕蛹蛋白多肽粗液加入到DEAE-52阴离子交换树脂层析柱，依次用双蒸水、0.1M、0.5M和1M的NaCl溶液洗脱，收集对ACE抑制活性最好的蛋白多肽，即为离子交换层析酶解物。

5.根据权利要求1所述的蚕蛹蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述凝胶柱层析步骤为：将离子交换层析酶解物溶于双蒸水配成浓度为20-30mg/mL的溶液，离心，上清液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，所述凝胶柱层析步骤中设置检测器灵敏度为0.2A，检测器调至280nm处检测，进样量1.8-2.2mL，流速为0.5-0.8mL/min。