[发明专利]甘蔗品种白条病室内抗性鉴定方法

权利要求书

1.一种甘蔗品种白条病室内抗性鉴定方法，其特征在于鉴定步骤如下：

（1）甘蔗白条病病原菌菌悬液培养

甘蔗白条病病原菌在XAS固体培养基上采用平板划线法活化两次，挑取单菌落在XAL培养液中28 ℃摇床培养12小时，将菌液离心去除上清液，用无菌水稀释为10⁸ CFU/mL，配制成甘蔗白条病病原菌菌悬液，备用；

（2）甘蔗品种或品系的种苗培育

将甘蔗品种或品系的蔗种砍断成单芽种茎，经过50 ℃温汤热水加0.1~0.2%的多菌灵处理2小时，随后移栽种植至育苗穴盘，当甘蔗植株长至3~4叶完全叶时，备用；

（3）接种鉴定

将步骤（1）得到的甘蔗白条病菌菌悬液通过剪叶接种到步骤（2）所述的各甘蔗品种或品系的种苗植株叶片上；将接种后的种苗移入人工气候培养箱，保持温度在28-32℃，湿度在60-80%；

（4）病情调查

接种3天后，开始调查甘蔗品种白条病发病严重度和发病率，每隔7天调查一次，调查四次，根据病情指数评价甘蔗品种或品系的白条病抗性水平，病情指数≤30%的为抗白条病的甘蔗品种或品系。

2.根据权利要求1所述的一种甘蔗品种白条病室内抗性鉴定方法，其特征在于步骤（1）所述的XAS固体培养基的制备方法为：取蔗糖20 g、细菌级蛋白胨5 g、磷酸氢二钾0.5 g、七水合硫酸镁0.25 g、硫酸钠0.05 g、溴化钾5 g、琼脂粉15 g、4 mg/ml苯菌灵的贮存液0.5ml，溶于900 ml纯水中，调pH=7.0后定容至1 L；将培养基分装后，在121 ℃下灭菌20分钟；将新生霉素、脱氧胆酸盐溶于水，配成重量浓度为1%的溶液，用细菌滤器过滤后制成抗生素贮存液，保存；待高压灭菌后的固体培养基凉至45-55 ℃时，加入抗生素贮存液，使其终浓度为新生霉素30 mg/L、脱氧胆酸盐200 mg/L。

3.根据权利要求1所述的一种甘蔗品种白条病室内抗性鉴定方法，其特征在于步骤（1）所述的XAL液体培养基的制备方法为：取蔗糖10 g、细菌级蛋白胨5 g、磷酸氢二钾0.35 g、七水合硫酸镁0.25 g、亚硫酸钠0.05 g、溴化钾5 g、4 mg/ml苯菌灵的贮存液0.5 ml，溶于900 ml纯水中，调pH=7.0后定容至1 L；将培养基分装后，在121 ℃下灭菌20分钟；将新生霉素、脱氧胆酸盐溶于水，配成重量浓度为1%的溶液，用细菌滤器过滤后制成抗生素贮存液，保存；待高压灭菌后的培养液温度不高于55℃时，加入抗生素贮存液，使其终浓度为新生霉素30 mg/L、脱氧胆酸盐200 mg/L。

4.根据权利要求1所述的一种甘蔗品种白条病室内抗性鉴定方法，其特征在于步骤（3）所述的剪叶接种法：用无菌剪刀蘸取步骤（1）的甘蔗白条病病原菌菌悬液后，一次性剪掉叶尖，并在完全叶叶片中间剪5 mm大小的伤口；每接种一次叶片，无菌剪刀蘸取一次甘蔗白条病病原菌菌悬液；在剪切下一次叶片前，重新蘸取甘蔗白条病病原菌菌悬浮液。