[发明专利]棕榈酰辅酶A的生物化学合成及纯化方法

权利要求书

1.一种棕榈酰辅酶A的生物化学合成方法，其特征在于，包括以下步骤：在磷酸钾缓冲液中依次加入ATP钠盐、辅酶A、棕榈酸和乙酰辅酶A合成酶，调整pH，定容，得到反应混合液，进行反应，收集反应产物，即得。

2.按照权利要求1所述的生物化学合成方法，其特征在于，所述ATP钠盐、辅酶A、棕榈酸、乙酰辅酶A合成酶的加入量为：在800ml磷酸钾缓冲液中，加入ATP钠盐0.507g、辅酶A0.767g、棕榈酸0.512g、乙酰辅酶A合成酶0.38KU。

3.按照权利要求1或2所述的生物化学合成方法，其特征在于：所述ATP钠盐为ATP·2Na。

4.按照权利要求1或2所述的生物化学合成方法，其特征在于：所述磷酸钾缓冲液的浓度为0.05M，pH值为7.5。

5.按照权利要求1所述的生物化学合成方法，其特征在于：所述调整pH为调整pH至7.5；

所述定容为：用磷酸钾缓冲液定容至1L；其中，所述磷酸钾缓冲液的浓度为0.05M，pH值为7.5。

6.按照权利要求1所述的生物化学合成方法，其特征在于，所述反应的条件包括：37℃反应2h；优选的，37℃水浴锅中反应2h。

7.按照权利要求1所述的生物化学合成方法，其特征在于，还包括：将反应产物进行纯化；其中，所述纯化的步骤包括：

(1)将反应产物过镍柱，收集过柱液，得到除蛋白后的产物；(2)将除蛋白后的产物加入乙醚萃取，除去有机杂质，分离出水相；(3)将水相用离子交换树脂除去无机杂质，所得收集液冻干，得到棕榈酰辅酶A粗品；(4)将棕榈酰辅酶A粗品加入到无水乙醇中，搅拌，过滤，得到固体，真空干燥，即得棕榈酰辅酶A。

8.按照权利要求7所述的生物化学合成方法，其特征在于，步骤(1)还包括：将镍柱先用5倍柱体积的双蒸水冲洗，然后用5倍柱体积的磷酸钾缓冲液平衡镍柱，再将反应产物过镍柱；

所述收集过柱液是在过反应产物半个柱体积后开始收集过柱液，过完反应产物后停止收集；

其中，所述磷酸钾缓冲液的浓度为0.05M，pH值7.5。

9.按照权利要求7所述的生物化学合成方法，其特征在于：步骤(2)将除蛋白后的产物加入等体积的乙醚萃取。

10.按照权利要求7所述的生物化学合成方法，其特征在于：步骤(4)所述无水乙醇的量为棕榈酰辅酶A粗品体积的5倍，所述搅拌为室温搅拌2小时，所述真空干燥为室温下真空干燥3-5小时。