[发明专利]一种红耳龟特异性引物及其应用在审
| 申请号： | 201810190950.3 | 申请日： | 2018-03-08 |
| 公开（公告）号： | CN108315434A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 龚世平;万小娟;李伟业;葛研;魏玉峰 | 申请（专利权）人： | 广东省生物资源应用研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 郝文婷;刘明星 |
| 地址： | 510260 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 特异性引物 野外 核苷酸序列 电泳检测 技术支持 快速识别 实验仪器 外来入侵 有效分子 有效手段 环境DNA 快速区 耗材 可用 条带 应用 物种 检测 调查 发现 | ||
1.一种红耳龟特异性引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示。
2.权利要求1所述红耳龟特异性引物在快速区分红耳龟与其它11种在中国野外有发现的龟类中的应用。
3.根据权利要求21所述的应用，其特征在于，所述其它11种在中国野外有发现的龟类包括：乌龟Mauremys reevesii、花龟Mauremys sinensis、黄喉拟水龟Mauremys mutica、安布闭壳龟Cuora amboinensis、大鳄龟Macroclemys temminckii、蛇鳄龟Chelydraserpentina、平胸龟Platysternon megacephalum、中华鳖Pelodiscus sinensis、山瑞鳖Palea steindachneri、亚洲鳖Amyda cartilaginea、佛罗里达鳖Apaloneferox。
4.一种快速区分红耳龟与其它11种龟类的方法，其特征在于，将红耳龟特异性引物用于PCR反应并进行电泳检测，通过所得目的条带的有无，快速区分红耳龟与其它11种龟类；
所述红耳龟特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示。
5.根据权利要求4所述的快速区分红耳龟与其它11种龟类的方法，其特征在于，所述PCR的反应体系为：25μL，模板DNA2.0μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，红耳龟特异性引物各1.0μL，ddH2O 8.5μL。
6.根据权利要求4所述的快速区分红耳龟与其它11种龟类的方法，其特征在于，所述PCR的反应条件为：①94℃4min；②94℃30s、57℃30s和72℃30s，共35个循环；③72℃延伸10min。
7.根据权利要求4所述的快速区分红耳龟与其它11种龟类的方法，其特征在于，所述电泳条件为140V，35min。
8.根据权利要求4所述的快速区分红耳龟与其它11种龟类的方法，其特征在于，所述其它11种龟类包括：乌龟Mauremys reevesii、花龟Mauremys sinensis、黄喉拟水龟Mauremysmutica、安布闭壳龟Cuora amboinensis、大鳄龟Macroclemys temminckii、蛇鳄龟Chelydra serpentina、平胸龟Platysternon megacephalum、中华鳖Pelodiscussinensis、山瑞鳖Palea steindachneri、亚洲鳖Amyda cartilaginea、佛罗里达鳖Apaloneferox。
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