[发明专利]一种清除鸭胆汁中异熊去氧胆酸的方法

说明书

本发明公开了一种清除鸭胆汁中异熊去氧胆酸的方法，包括鹅去氧胆酸粗品制备、结晶液的制备、析晶得鹅去氧胆酸结晶液、鹅去氧胆酸纯品的制备等工艺步骤。通过本发明方法，既能提纯鸭胆汁中的鹅去氧胆酸，又能分离出具有药学价值的异熊去氧胆酸，最大程度地提高了胆汁酸资源的利用率。且本发明方法产生的下脚料少，能够通过萃取循环利用，很大程度上减少了胆汁酸资源的流失。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体地涉及一种清除鸭胆汁中异熊去氧胆酸的方法。

背景技术

人们对胆酸类化合物的研究有着较长的历史，在生物化学快速发展的推动下，对胆酸类化合物的研究也在不断的深入。鹅去氧胆酸是目前世界上用量最大的治疗胆结石的药物之一，又是合成熊去氧胆酸的主要原料，在鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸的市场需求量不断快速增长的情况下，为了拓宽其原料的来源，人们开始从低成本、原料易得的鸭胆汁中提取鹅去氧胆酸，以获得更多的制备熊去氧胆酸的原料。

加工过程中，为了使鹅去氧胆酸的提取纯度更高，人们采用了多种方法去除鸭胆汁中的别胆酸杂质，然而效果并不显著。经过多年研究发现，鸭胆汁中还存在一种叫做异熊去氧胆酸的杂质，该杂质的含量一般在7-8%之间，仅次于鸭胆汁中别胆酸杂质的含量，同样属于提纯鹅去氧胆酸时最不好清除的杂质，这必将影响鹅去氧胆酸制备熊去氧胆酸时的转化率。

此外，异熊去氧胆酸是熊去氧胆酸的差向异构体，生化分析检测人体胆固醇代谢指标时，需采用高纯度的异熊去氧胆酸作为标准物质，因而异熊去氧胆酸具有重要的生物利用价值。所以说从来源于鸭胆汁原料的鹅去氧胆酸中清除异熊去氧胆酸，不仅是提纯鹅去氧胆酸的又一重要步骤，同时通过清除而得到的异熊去氧胆酸还可以用于生产胆汁酸的下游产品。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种清除鸭胆汁中异熊去氧胆酸的方法，其目的是为了在鸭胆汁原料中提取鹅去氧胆酸时分离异熊去氧胆酸杂质，该方法是利用鹅去氧胆酸和异熊去氧胆酸在酯类、多元醇和脂肪烃类化合物三者特定比例的混合溶剂中，存在的溶解度差异而结晶析出异熊去氧胆酸，从而实现鹅去氧胆酸的精制提取。

本发明的技术方案：一种清除鸭胆汁中异熊去氧胆酸的方法，其特征在于，工艺步骤如下：

（1）鹅去氧胆酸粗品制备：利用鸭胆汁原料，通过乙酸丁酯镁盐法制得鹅去氧胆酸粗品，粗品的湿重小于0.6%，别胆酸的含量小于1.0%，异熊去氧胆酸的含量大于7%。

（2）结晶液的制备：在步骤（1）制备的鹅去氧胆酸粗品中，加入粗品6倍量且水份小于1%的乙酸乙酯，以及粗品0.5倍量且纯度为99.5%的乙二醇，搅拌加热至沸，保沸溶解1小时至粗品完全溶解。静置1小时分出下层水相，通过反应釜回流分水器调节上层有机相的水分，使上层有机相的水分含量小于1.0%；然后将上层有机相采用常压浓缩，在浓缩的有机相中计量回收加入的乙酸乙酯和乙二醇混合溶剂，回收量为混合溶剂加入量的一半；回收完毕，再次测定并调节有机相的水分含量为1.0%以下，冷却至29-30℃，备用。

向上述有机相中加入步骤（1）中粗品0.003倍量的冰乙酸和0.15倍量的120#汽油，再于28-30℃的温度条件下搅拌至澄清，测定并调节有机相的PH值为3.5-4之间、水分含量为1.2-1.5%。加入冰乙酸是为了增加胆汁酸的溶解度，加入脂肪烃类化合物120#汽油是为了吸水和降低异熊去氧胆酸的溶解度。

（3）析晶：将步骤（2）制备的结晶液通过12-15HZ的变频搅拌，冷却至23-25℃，连续搅拌反应10-12小时，结晶液由澄清逐渐变为浑浊，通过嵌入式板框压滤机压滤，得到异熊去氧胆酸的滤渣和鹅去氧胆酸结晶液。其中，异熊去氧胆酸的滤渣呈淡灰色的絮状物，经检测其湿重为29-31%，纯度为89-91%。