[发明专利]快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法及装置在审
申请号: | 201810193030.7 | 申请日: | 2018-03-09 |
公开(公告)号: | CN108535145A | 公开(公告)日: | 2018-09-14 |
发明(设计)人: | 齐素文;李乔亮;何旭东 | 申请(专利权)人: | 深圳市瑞图生物技术有限公司 |
主分类号: | G01N15/00 | 分类号: | G01N15/00;G01N15/10 |
代理公司: | 深圳市中知专利商标代理有限公司 44101 | 代理人: | 张学群;郭爱青 |
地址: | 518000 广东省深圳市宝安区福*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 网织红细胞 外周血液 血液样本 细胞液 稀释 油包 快速检测 微孔 检测 外周血样本 单个细胞 生理盐水 数量检测 荧光染色 检测板 染色 放入 捕获 | ||
1.一种快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1血液样本稀释:将一定量的外周血液用生理盐水准确稀释50-100倍,得到稀释血液样本(10);
步骤2将步骤1得到的稀释血液样本(10)进行荧光染色,使网织红细胞中的RNA与荧光染色液工作液(20)结合1~3分钟,得到染色后血液样本(30);
步骤3仅包含单个细胞的油包细胞液滴(50)生成:将染色后血液样本(30)分散在生物相容性好的硅油(40)中,将所有红细胞包裹成仅包含单个细胞的油包细胞液滴(50),每个所述油包细胞液滴(50)的直径为200um;
步骤4油包细胞液滴(50)的捕获:用微电子机械系统技术在硅片、玻璃或高分子材料基片上制作开有若干检测微孔(61)的检测板(60),所述检测微孔(61)的数量大于步骤三中油包细胞液滴(50)的数量;使将步骤3中得到的油包细胞液滴(50)全部放入检测微孔(61),且每个检测微孔(61)中最多只能容一个油包细胞液滴(50)。
步骤5网织红细胞数量检测:利用荧光检测装置扫描整个检测板(60),获取每个检测微孔(61)的荧光强度值,可测到荧光强度的检测微孔(61)的数量为网织红细胞的数量;
步骤6根据检测板(60)检测的网织红细胞数量,计算出单位体积外周血样本中网织红细胞的含量,即用网织红细胞的数量除以外周血液的体积。
2.如权利要求1所述的快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法,其特征在于,步骤3中,采用液滴微流控的单细胞液滴形成装置(90)形成仅包含单个细胞的油包细胞液滴;
所述单细胞液滴形成装置(90)为利用软光刻法制制得的PDMS微通道芯片,所述PDMS微通道芯片的微通道结构为“十字”型,包括呈直线形分布的分散相流入通道(91)、单细胞液滴流出通道(93),分散相流入通道(91)、单细胞液滴流出通道(93)之间设有喉部(931),分散相流入通道(91)的两侧设有与分散相流入通道(91)垂直相通的两个连续相流入通道(92);分散相流入通道(91)入口处设有使分散相进入分散相流入通道(91)、且可控制分散相流入速度的第一驱动控制(95),每个连续相流入通道(92)的入口处分别设有使分散相进入连续相流入通道(92)、且可控制分散相流入速度的第二驱动控制(94)。
3.如权利要求2所述的快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法,其特征在于,步骤2中,所述荧光染色液工作液(20)为噻唑橙工作液;噻唑橙工作液配制方法如下:将噻唑橙染料溶于甲醇配成浓度为lmg/ml的溶液,-20℃保存,作为染料储存液。取浓度为lmg/ml的染料储存液用含2mmol/L EDTA的pH7.4磷酸缓冲液以1:10000的浓度稀释,成为终浓度为l00ng/ml的噻唑橙工作液;成为终浓度为l00ng/ml的噻唑橙工作液。
4.如权利要求2所述的快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法,其特征在于,步骤3中,所述硅油(40)采取以下方式制得:称取0.1克Span 80(C24H4406,Sigma-Aldrich,StLouis,USA)加入4.9克十四烷(C14H30,Acros Organics,Geel,Belgium)溶液中,配制成2%Span的十四烷。
5.如权利要求2-4所述的快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法,其特征在于,所述流入通道、流出通道的宽度均为200um,单细胞液滴流出通道(93)的喉部(931)的宽度100um、长度为200um,喉部(931)上还设有流量调节装置(96)。
6.如权利要求5所述的快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法,其特征在于,所述检测微孔(61)为直径300um、高度为300um的圆柱腔室,相邻两列检测微孔(61)采用交错分布的布局方式。
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