[发明专利]快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法及装置

说明书

本发明公开一种快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法，包括以下步骤：1，血液样本稀释：将一定量的外周血液用生理盐水准确稀释50‑100倍，得到稀释血液样本；步骤2将步骤1得到的稀释血液样本进行荧光染色，得到染色后血液样本；3，仅包含单个细胞的油包细胞液滴生成；4，油包细胞液滴的捕获：使油包细胞液滴全部放入检测微孔，且每个检测微孔中最多只容一个油包细胞液滴；5，网织红细胞数量检测；6，根据检测板检测的网织红细胞数量，计算出单位体积外周血样本中网织红细胞的含量。同时公开了一种快速检测外周血液中网织红细胞数量的装置。

技术领域

本发明涉及外周血液中网织红细胞的计数领域，特别是一种快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法及装置。

背景技术

人体外周血液中含有极少量尚未成熟的网织红细胞，其形态特征为细胞胞质中残存部分嗜碱性物质(RNA)。目前检测网织红细胞的方法主要包括以下几种：(1)人工镜检方法：利用煌焦油蓝染液对血液标本中的红细胞进行推片、染色、烘干得到细胞制片，然后在显微镜下进行观察。观察者选择制片上细胞分布较均匀、厚薄适中的部位，在显微镜的油镜镜头下(放大1000倍)观察并进行计数。人工显微镜计数方法是目前网织红细胞计数的参考方法，但是操作较繁琐、效率很低；(2)流式细胞仪法：荧光染料与网织红细胞中的RNA结合后，在荧光照射下发出特征性的荧光。在流式细胞分析仪中，网织红细胞中的RNA与荧光染料如噻唑橙、派若宁、亚啶橙等结合之后，在鞘流的作用下，细胞单个通过流式细胞仪的检测器，机器发出的荧光照射于细胞上，根据细胞能否发射出特定颜色的荧光，荧光强度，或光吸收量大小、光散射量多少等参数的比例关系对网织红细胞进行计数。该方法自动化程度较高，相比人工镜检方式，效率明显提高，但是仍存在以下不足：第一，网织红细胞中的RNA呈网状或团状分布，RNA与荧光染料结合之后，荧光信号散在分布，细胞通过检测器时，根据荧光信号很难区分出单个细胞。第二，流式细胞分析仪的溶液管路设计复杂，成本很高，必须重复使用，容易导致样本之间的交叉污染。三，流式细胞分析仪检测采用鞘流原理，细胞必须单个依次通过荧光检测机构，导致测试速度减慢。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法及装置，能精准完成网织红细胞计数、提高网织红细胞计数的效率且能完全杜绝不同样本之间交叉污染。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

一种快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法，包括以下步骤：

步骤1血液样本稀释：将一定量的外周血液用生理盐水准确稀释50-100倍，得到稀释血液样本；

步骤2将步骤1得到的稀释血液样本进行荧光染色，使网织红细胞中的RNA与荧光染色液工作液结合1～3分钟，得到染色后血液样本；

步骤3仅包含单个细胞的油包细胞液滴生成：将染色后血液样本分散在生物相容性好的硅油中，将所有红细胞包裹成仅包含单个细胞的油包细胞液滴，每个所述油包细胞液滴的直径为200um；

步骤4油包细胞液滴的捕获：用微电子机械系统技术在硅片、玻璃或高分子材料基片上制作开有若干检测微孔的检测板，所述检测微孔的数量大于步骤三中油包细胞液滴的数量；使将步骤3中得到的油包细胞液滴全部放入检测微孔，且每个检测微孔中最多只能容一个油包细胞液滴；

步骤5网织红细胞数量检测：利用荧光检测装置扫描整个检测板，获取每个检测微孔的荧光强度值，可测到荧光强度的检测微孔的数量为网织红细胞的数量；

步骤6根据检测板检测的网织红细胞数量，计算出单位体积外周血样本中网织红细胞的含量，即用网织红细胞的数量除以外周血液的体积。

优选地，步骤3中，采用液滴微流控的单细胞液滴形成装置形成仅包含单个细胞的油包细胞液滴；