[发明专利]餐饮中金黄色葡萄球菌的快速检测方法

说明书

本发明提供了餐饮中金黄色葡萄球菌的快速检测方法，方法为：1)增菌：称取样品至氯化钠肉汤中，均质后，厌氧培养；2)分离：将增菌后的培养物，划线接种到金黄色葡萄球菌选择性平板上，厌氧培养；3)初步鉴定：根据形貌初步确定金黄色葡萄球菌菌落；4)确证鉴定：挑取金黄色葡萄球菌选择性平板上可疑菌落接种到血平板上，培养，观察是否溶血，选取溶血的菌落利用VITEK 2 COMPACT全自动微生物分析系统进行生化鉴定；得到结果。与现有技术相比，本发明利用了金黄色葡萄球菌为需氧兼性厌氧菌以及其代谢产物中能产生血浆凝固酶的特点，对于不溶血的可疑菌落不用再做鉴定试验，缩短了金黄色葡萄球菌的检测时间，减小了检测难度。

技术领域

本发明属于食品检测领域，具体涉及餐饮中金黄色葡萄球菌的快速检测方法。

背景技术

餐饮是人们赖以生存的基础，随着生活节奏的加快，工作压力的增加，特别是互联网销售的突起，人们对于大众化餐饮的需求每年都在呈现上升趋势，线上订餐已经成为一种流行。

餐饮食品中的致病菌常规检测项目为金黄色葡萄球菌和沙门氏菌。金黄色葡萄球菌(Staphylococous aureus)系微球菌科，兼性厌氧菌，抵抗能力较强，分布较广，广泛存在于空气、尘埃、水以及人和动物的排泄物中,是引起食物中毒的常见致病菌之一，也是在餐饮食品检测中检出率最高的致病菌。

据美国疾病控制中心报告，在美国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒数量仅次于大肠埃希菌，居第2位，占细菌性食物中毒的33％，而在加拿大则占45％。日本的调查结果表明，平均32.5％的食品存在金黄色葡萄球菌的污染。2010—2012年北京市共报告细菌性食物中毒27起,其中金黄色葡萄球菌食物中毒占22％。

现有的金黄色葡萄球菌的检测方法为GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》，该标准中第一法金黄色葡萄球菌定性检验从样品增菌到最后确证鉴定，需要5天时间，而且由于餐饮中大多含有大肠菌群、表皮葡萄球菌和人葡萄球菌等其他微球菌的干扰，且微球菌属在Baird-Parker平板上菌落形态极其相似，不宜区分，增加了检测难度。

发明内容

为解决现有检测标准GB 4789.10-2016检测餐饮中金黄色葡萄球菌时间长，干扰大、对检验人员要求高等问题，本发明提供了餐饮中金黄色葡萄球菌的快速检测方法。

本发明具体技术方案如下：

餐饮中金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括以下步骤：

1)增菌：称取待测样品至氯化钠肉汤中，均质后，厌氧培养；

2)分离：将增菌后的培养物，划线接种到金黄色葡萄球菌选择性平板上，厌氧培养；

3)初步鉴定：根据形貌初步确定金黄色葡萄球菌菌落；

4)确证鉴定：挑取金黄色葡萄球菌选择性平板上至少5个可疑菌落接种到血平板上，培养，观察是否溶血，选取溶血的菌落利用VITEK 2COMPACT全自动微生物分析系统进行生化鉴定；得到结果。

步骤1)中所述均质为8000r/min-10000r/min均质1-2min；所述厌氧培养具体为：36±1℃厌氧培养18h-24h。

步骤1)具体为：称取25g样品至225mL 7.5％氯化钠肉汤中，8000r/min-10000r/min均质1-2min后，于36±1℃厌氧培养18h-24h。

步骤2)中所述金黄色葡萄球菌选择性平板制备方法为：

取Baird-Parker培养基于蒸馏水中加热煮沸至完全溶解，高压灭菌后，加入亚碲酸钾卵黄增菌液，再加入冻干兔血浆，混匀后倾注平板备用。

步骤2)中所述金黄色葡萄球菌选择性平板制备方法具体为：