[发明专利]蛋白质和糖蛋白的酶解方法

说明书

本发明公开了蛋白质和糖蛋白的酶解方法。本发明公开的蛋白质或糖蛋白的酶解方法，包括：将蛋白质或糖蛋白与蛋白酶于反应体系中孵育0.5‑15分钟，完成蛋白质或糖蛋白的酶解；反应体系含有NH₄HCO₃，反应体系中NH₄HCO₃的浓度大于0mM小于等于100mM；反应体系中蛋白质或糖蛋白与蛋白酶的质量比为1：(0.0001‑3)；孵育的时间为0.5‑10分钟，温度为4‑80℃。本发明的方法可应用于需要蛋白质酶解的领域：如蛋白质的鉴定，获得特定的糖肽，鉴定带有突变氨基酸的肽段等。

技术领域

本发明涉及生物和化学技术领域中，蛋白质和糖蛋白的酶解方法。

背景技术

研究蛋白质酶解具有如下意义：1、通过酶把蛋白质酶切获得蛋白质肽段，用质谱采集获得肽段指纹图谱用于鉴定蛋白质，可以生产蛋白质鉴定试剂盒或蛋白质酶解试剂盒；2、获得特定的酶解肽段进行科学研究，如获得需要研究的糖肽，获得带有氨基酸突变的肽段等；3、确定研究蛋白质的翻译后修饰位点，如：糖基化位点，甲基化位点、乙酰化位点等。

目前蛋白质酶解的方法有：

(1)、传统的酶解方法：酶解时间在12小时或以上，该方法的缺点：耗时，且一般很少用于小体积或小质量蛋白质的酶解。

(2)、把酶固定在固体材料表面的方法：固体材料表面酶的浓度升高，加快酶解速度。该方法的缺点：消耗固体材料和酶，使简单的酶解过程变复杂，引入的材料不利于后面的科学研究，以及损失蛋白质和酶(固体材料表面吸附作用)，更不利于小体积或小质量蛋白质的酶解。

(3)、微波法、超声波法、红外线辐射法和激光辐射法等：这些方法通过提供能量使被酶解蛋白质暴露出更多的酶解位点，而加快酶解速度。这些方法的缺点：需要额外设备，使酶解操作变得复杂，而且也不利于野外作业。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何快速酶解蛋白质或糖蛋白。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了蛋白质或糖蛋白的酶解方法，所述方法包括：将待酶解物质与蛋白酶于反应体系中孵育0.5-15分钟，完成所述待酶解物质的酶解；

所述待酶解物质为蛋白质或糖蛋白；

所述反应体系含有NH₄HCO₃。

上述方法中，所述反应体系中NH₄HCO₃的浓度可大于0mM小于等于100mM。

上述方法中，所述反应体系中所述待酶解物质与所述蛋白酶的质量比可为1：(0.0001-3)。

所述孵育的时间可为0.5-10分钟。所述孵育的时间进一步可为5分钟。所述孵育的时间满足使所述待酶解物质的酶解，该时间因所述待酶解物质的量或浓度的不同而有所变化，如2ng/μL≤所述待酶解物质的浓度≤10ng/μL时，所述孵育的时间可为5min；10ng/μL≤所述待酶解物质的浓度时，所述孵育的时间可小于等于5min。

所述孵育的温度可为4-80℃。

上述方法中，所述反应体系的体积可满足在所述孵育结束时所述反应体系中液体全部蒸发，所述待酶解物质的酶解可在所述反应体系中液体的蒸发过程中完成，将该方法记为方法1。

上述方法1中，所述反应体系的体积可为0.1-10μL。所述反应体系可处于开放的环境中。所述环境可为普通空气环境。由于所述反应体系的体积比较小，在进行所述孵育时，所述反应体系中的水逐渐蒸发，进而导致所述反应体系的体积逐渐减少，在所述孵育结束时，得到体积变小的反应体系或所述反应体系在所述反应体系所在容器中由反应产物形成的靶点。