[发明专利]一种植物倍性分析试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种植物倍性分析试剂盒，包括检测试剂和检测器械，使用本试剂盒即可完成植物倍性分析样品处理工作，省时省力，本检测试剂盒通过优化提取液配方，得到最佳的植物DNA获得率和植物基因组DNA的完整性，对植物DNA提取和染色效果好，为流式细胞仪的倍体分析提供了有利的条件。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种植物倍性分析试剂盒。

背景技术

植物染色体倍性现象在自然界普通存在，单倍体及其加倍后的二倍体系（DH）在遗传上是一致的，单倍体及其DH系在植物细胞学、作物遗传及育种上具有重要作用，可加速育种进程，缩短育种周期，提高选育效益。倍性鉴定分为直接鉴定和间接鉴定。直接鉴定即染色体计数，包括常规压片法和去壁低渗法。虽然这些方法是鉴定倍性的最基本和应用最普遍的方法，但是对技术要求很高，对细胞核较小或染色体对数多的植物要得到准确的结果有很大的难度。间接鉴定是指通过形态、生理生化指标、生育状况进行鉴定，或者从细胞水平和分子水平上鉴定。流式细胞术就是分子水平上的间接鉴定，在用流式细胞仪对样本进行测定前，需要对样本进行处理，样本处理中试剂的选择不当会直接导致实验失败，因此，选择一种合适的植物倍性分析试剂成为急需解决的问题之一。

发明内容

鉴于以上现有技术的缺陷，本发明要解决的技术问题是：提供一种稳定性高、对多倍体植物的提取和染色高效的植物倍性分析试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明公开了一种植物倍性分析试剂盒，采取的技术方案为：

一种植物倍性分析试剂盒，包括提取液、染色液、漂洗液，所述的提取液包括提取液A、提取液B和萃取液C，提取液A包括Mgcl2、Nacl、TritonX-100、EDTA、Tris、MOPS、PVP，提取液B为β-巯基乙醇，萃取液C为色谱纯的异丙醇；所述染色液包括RNase A、PI；所述漂洗液为色谱纯的75%乙醇。

进一步的，所述的提取液A中还包括NaOH,浓度为1g/L。

进一步的，所述的植物倍性分析试剂盒还包括尼龙网、培养皿、离心管、组织剪。

进一步的，所述的尼龙网孔径为300或400目。

一种植物倍性分析试剂盒的使用方法，其特征在于，按照以下步骤进行：

（1）提取液A中加入蛋白酶K，添加浓度为20mg/ml，再与提取液B按照9:1混合，放于4℃预冷备用，现用现配；

（2）称取植物幼叶样本1g，蒸馏水将叶片表面洗净后滤纸吸干，放入4℃预冷的培养皿中，加入2ml步骤（1）中预冷的混合提取液，用组织剪将样本快速剪碎，放到摇床上，冰浴下裂解20min；

（3）用尼龙网过滤，滤液置于1.5ml离心管中，4℃温度下12000 rpm离心10min；

（4）取离心后上清，加入2倍体积的萃取液C，充分混匀后，-20℃静置25min，12000rpm离心10min，小心去除上清，保留管底白色沉淀；

（5）加入漂洗液洗涤沉淀，加入时将沉淀轻轻吹起， 12000rpm离心10min后去除漂洗液，重复洗涤2次；

（6）将洗涤后的沉淀在无菌无DNase环境下干燥15min；

（7）每管加入1ml染色液，避光孵育15min；

（8）上流式细胞仪进行倍性检测。

进一步的，步骤（2）剪碎样本的整个过程样本均需泡在提取液中，便于游离细胞核。