[发明专利]一种R-3-氨基丁酸的制备方法有效
| 申请号： | 201810198044.8 | 申请日： | 2018-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN108374027B | 公开（公告）日： | 2019-08-20 |
| 发明（设计）人： | 杨卫华;张飞龙;钱敏帆;肖延铭;谈聪 | 申请（专利权）人： | 长兴制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P13/04 | 分类号： | C12P13/04 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 顾晨 |
| 地址： | 313100 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 氨基丁酸 制备 巴豆 控制反应体系 生物酶催化剂 硫酸根离子 天冬氨酸酶 氨水调节 碱性条件 浓缩结晶 铵根离子 副产物 高杂质 酶蛋白 镁离子 逆反应 色素 优质产品 底物 菌泥 纳滤 微滤 铵盐 截留 | ||
1.一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：以巴豆酸、铵盐为底物，加入含有镁离子的盐，用氨水调节pH；加入重组天冬氨酸酶作为生物酶催化剂，在适宜温度和pH为8.5-9.5的条件下进行生物酶催化反应，反应后经分离、纯化、结晶，获得R-3-氨基丁酸；所述生物酶催化反应中，所述巴豆酸的浓度为100~400g/L。
2.根据权利要求1所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：所述铵盐中的铵根离子与巴豆酸的摩尔比为0.2~0.4:1。
3.根据权利要求1所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：所述的镁离子浓度为0.01~0.03mol/L。
4.根据权利要求1或2所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：所述重组天冬氨酸酶与底物巴豆酸质量比为0.03~0.05:1。
5.根据权利要求1所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：所述铵盐为硫酸铵、氯化铵、乙酸铵、甲酸铵的任意一种或多种的组合。
6.根据权利要求5所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：所述铵盐为硫酸铵。
7.根据权利要求1所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：加入生物酶催化剂后，生物酶催化反应的pH为8.5~9.5。
8.根据权利要求1所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：所述生物酶催化反应的温度为30℃~50℃。
9.根据权利要求1所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于，所述重组天冬氨酸酶的获得方法是：将来源于芽孢杆菌的天冬氨酸酶编码基因进行克隆，获得重组质粒，加入感受态宿主细胞进行转化获得工程菌株；然后依次经发酵培养、细胞破碎处理获得；所述重组质粒的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.1所述基因序列。
10.根据权利要求9所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：所述宿主细胞为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、毕赤酵母的任意一种。
11.根据权利要求9所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：所述重组质粒选用pET、pGEX、pMAL的任意一种作为载体。
12.根据权利要求1所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：生物酶催化反应后的分离步骤采用膜过滤工艺，先选用截留相对分子质量大于3000-5000道尔顿物质的微滤膜进行分离，对微滤膜清液再选用截留相对分子质量大于120~200道尔顿物质的钠滤膜进行分离。
13.根据权利要求1所述的一种R-3-氨基丁酸的制备方法，其特征在于：该方法获得的R-3-氨基丁酸手性纯度不低于99.95%，杂质纯度不低于99%，含量不低于99%，产品收率不低于85%。
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