[发明专利]一种杜鹃花种子的石蜡切片制作方法

权利要求书

1.一种杜鹃花种子的石蜡切片制作方法，其特征在于：取授粉后的杜鹃花子房浸泡于FAA固定液中固定，取出用清水清洗后,沿着所述杜鹃花子房内的中轴长度方向切成长度为0.2cm～0.5cm,宽度为0.2cm～0.5cm和厚度为0.2cm～0.5cm的切块,放入软化剂中浸泡软化，软化后进行染色和返蓝，再依次进行脱水与透明、浸蜡与包埋、切片、展片、粘片、载玻片烘干、脱蜡、封片即制成杜鹃花种子的石蜡切片；所述染色是：取出软化好的切块，清水洗2～3次，浸泡于苏木素染色液中染色3～7天；返蓝是：取出染好色的切块，放入清水中浸泡，在此浸泡期间进行换水处理，直至水不变色且切块变成深蓝色为止。

2.根据权利要求1所述的杜鹃花种子的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述授粉后的杜鹃花子房浸泡于FAA固定液中固定的时间是7～30天。

3.根据权利要求1所述的杜鹃花种子的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述取出用清水清洗后是用清水清洗2～3次后，所述放入软化剂中浸泡软化，其浸泡软化的时间是15～30天，所述软化剂由体积比为1:1的70％v/v乙醇和甘油混合而成。

4.根据权利要求1所述的杜鹃花种子的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述脱水与透明是将返蓝后的切块取出，先放入50％v/v酒精中浸泡2小时，再放入70％v/v酒精中过夜；次日取出切块，依次放入85％v/v酒精、95％v/v酒精、无水乙醇中浸泡脱水，各梯度溶液中浸泡脱水1小时；从无水乙醇中取出切块先放入体积比为2:1的无水乙醇和二甲苯混合液中浸泡1小时，再放入新的体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液中浸泡1小时，然后放入纯二甲苯中浸泡1小时，再放入新的纯二甲苯中浸泡1小时。

5.根据权利要求1所述的杜鹃花种子的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述浸蜡与包埋是将脱水与透明后的切块放入容器，加入纯二甲苯将切块淹没，按纯二甲苯:碎石蜡的质量比为1:0.3的比例加入碎石蜡，待碎石蜡溶解后再按如此方式重复加入2～3次碎石蜡，然后将容器放入35℃烘箱中过夜；次日将烘箱温度调至42℃，每隔4小时向容器内加入一次碎石蜡，共加三次碎石蜡，每次均按纯二甲苯:碎石蜡的质量比为1:0.5的比例加入碎石蜡，之后在42℃过夜，42℃过夜后的第二日将烘箱温度调至60℃，先将容器内的溶液全部倒掉，往容器内倒满新的液体石蜡，间隔4小时后将容器内的液体石蜡全部倒掉，往容器内倒满新的液体石蜡，间隔4小时后再将容器内的液体石蜡全部倒掉，再往容器内倒满新的液体石蜡，之后在60℃过夜，60℃过夜后的第二日，仍然保持容器在温度为60℃的烘箱内，先将容器内的液体石蜡全部倒掉，往容器内倒满新的液体石蜡，间隔4小时后将容器内的液体石蜡全部倒掉，再往容器内倒满新的液体石蜡，间隔4小时之后将容器从烘箱中取出放在石蜡包埋机上进行石蜡包埋即获得含有切块的蜡块。

6.根据权利要求1所述的杜鹃花种子的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述切片、展片、粘片、载玻片烘干是将经过浸蜡与包埋获得的含有切块的蜡块固定在轮转式切片机上，设定8～10微米的切片厚度后进行石蜡连续切片得蜡片，将蜡片置于温度为42℃的水浴锅中展片使蜡片展开，将载玻片用甘油蛋白涂片后放入水中将展开的蜡片粘附其上，最后将粘完蜡片的载玻片放入40℃恒温箱中烘干。

7.根据权利要求1所述的杜鹃花种子的石蜡切片制作方法，其特征在于：所述脱蜡、封片是将烘干后的载玻片先放入体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液浸泡15分钟，再放入纯二甲苯浸泡25分钟，最后放入新的纯二甲苯中浸泡35分钟后取出载玻片，用中性树胶封片即制成杜鹃花种子的石蜡切片。