[发明专利]一种杜鹃花种子的石蜡切片制作方法

说明书

本发明公开一种杜鹃花种子的石蜡切片制作方法。该方法的主要特征是，取授粉后的杜鹃花子房经固定、软化后就进行染色，然后再脱水、浸蜡与包埋、切片、展片、粘片、载玻片烘干、脱蜡、封片。本发明方法能够得到染色清晰，组织结构完整的杜鹃花种子石蜡切片，克服了现有石蜡切片技术在浸蜡与包埋、切片、粘片、展片、脱蜡后才染色极易导致在染色的过程大量种子脱落致使切片中种子结构不完整的缺陷。

技术领域

本发明涉及一种石蜡切片技术领域，尤其涉及一种杜鹃花种子的石蜡切片制作方法。

背景技术

杜鹃花为世界名花，利用其野生种质资源开展远缘杂交育种能有效提高现有杜鹃花品种的观赏性及其抗性。但杂交障碍，特别是受精后障碍，是限制杜鹃花远缘杂交成功的一个重要原因。石蜡切片技术能从细胞水平上研究杂种胚胎发育过程，从而为远缘杂交育种提供可靠依据。

目前，杜鹃花根、茎、叶、果实、种子的石蜡切片制作均采用如下操作工序：(1)取材、(2)固定、(3)软化、(4)脱水、(5)透明、(6)浸蜡与包埋、(7)切片、展片、粘片、(8)脱蜡、(9)染色、(10)透明、(11)封片。石蜡切片通常为微米级薄片，此方法采用先切片后染色的工序进行操作，此操作工序，对于杜鹃花种子而言，极易导致在染色的过程大量种子脱落而致使切片中种子结构不完整。为解决这一难题，需要研发一种适宜于杜鹃花种子的石蜡切片制作方法。

发明内容

为解决现有杜鹃花种子的石蜡切片制作过程中种子易大量脱落而难以得到完整种子组织结构的技术问题，本发明提供一种染色清晰，组织结构完整的杜鹃花种子的石蜡切片制作方法。

本发明提供的一种杜鹃花种子的石蜡切片制作方法包括：取授粉后的杜鹃花子房浸泡于FAA固定液中固定，取出用清水清洗后,沿着所述杜鹃花子房内的中轴长度方向切成长度为0.2cm～0.5cm,宽度为0.2cm～0.5cm和厚度为0.2cm～0.5cm的切块,放入软化剂中浸泡软化，软化后进行染色和返蓝，再依次进行脱水与透明、浸蜡与包埋、切片、展片、粘片、载玻片烘干、脱蜡、封片即制成杜鹃花种子的石蜡切片；所述染色是：取出软化好的切块，清水洗2～3次，浸泡于苏木素染色液中染色3～7天；返蓝是：取出染好色的切块，放入清水中浸泡，在此浸泡期间进行换水处理，直至水不变色且切块变成深蓝色为止。

进一步，所述授粉后的杜鹃花子房浸泡于FAA固定液中固定的时间是7～30天。

进一步，所述取出用清水清洗后是用清水清洗2～3次后，所述放入软化剂中浸泡软化，其浸泡软化的时间是15～30天，所述软化剂由体积比为1:1的70％v/v乙醇和甘油混合而成。

进一步，所述脱水与透明是将返蓝后的切块取出，先放入50％v/v酒精中浸泡2小时，再放入70％v/v酒精中过夜；次日取出切块，依次放入85％v/v酒精、95％v/v酒精、无水乙醇中浸泡脱水，各梯度溶液中浸泡脱水1小时；从无水乙醇中取出切块先放入体积比为2:1的无水乙醇和二甲苯混合液中浸泡1小时，再放入新的体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液中浸泡1小时，然后放入纯二甲苯中浸泡1小时，再放入新的纯二甲苯中浸泡1小时。