[发明专利]可注射型同种异体脂肪脱细胞基质微粒的制备方法及应用

权利要求书

1.一种可注射型同种异体脂肪脱细胞基质微粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）脂肪采集及纯化处理；

通过吸脂技术获取人源性的脂肪颗粒，将所得的脂肪颗粒用漂洗液清洗两遍，以去除脂肪组织中的红细胞，收集脂肪颗粒于注射器内，离心操作；

弃去上层油脂和下层液体，收集中部的脂肪颗粒；

（2）乳糜化处理；

将步骤（1）获得脂肪颗粒进行机械乳糜化处理，离心去油，制成脂肪微粒；

所述乳糜化处理包括如下步骤：

1)口注射器抽取脂肪颗粒，通过鲁尔接头与另一螺旋口注射器相连，来回推注这两个注射器直至脂肪颗粒在推注器中移动流畅；

2）依次连接孔径逐渐减小的鲁尔接头重复至少两次上述步骤1）进行逐层乳糜化，网筛过滤，获取直径小于200um的可注射型脂肪微粒；

（3）脱细胞处理；

将步骤（2）所得的脂肪微粒脱去细胞碎片及抗原，同时通过漂洗和离心进一步去油和脱脂，获得脂肪脱细胞基质微粒；

脱细胞处理中的脱去细胞碎片及抗原的具体过程包括：

将所得的脂肪微粒置于1M~2M高渗氯化钠溶液，在37℃浸泡2小时，漂洗3次，每次均离心换液；再放入1~3% Triton X-100 室温下震荡处理10~12小时，漂洗4次，每次均离心换；最后用0.2% DNase和200ug/mL RNase在37℃震荡处理处理1~3小时，再漂洗；

上述离心转速为以1200rpm~1500rpm离心5min；

干燥灭菌处理；

将步骤（3）所得的脂肪脱细胞基质微粒进行冷冻干燥，辐照灭菌。

2.根据权利要求1所述的一种可注射型同种异体脂肪脱细胞基质微粒的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中的吸脂技术为水动力辅助吸脂技术、传统机械负压和手工注射器负压吸脂技术、超声辅助吸脂技术或共振辅助吸脂技术中的至少一种；

步骤（1）中的离心转速3000rpm~5000rpm，离心时间为3~5分钟；

所述漂洗液为无菌的蒸馏水、生理盐水或者PBS缓冲液。

3.根据权利要求2所述的一种可注射型同种异体脂肪脱细胞基质微粒的制备方法，其特征在于：

所述漂洗液优选为蒸馏水。

4.根据权利要求1所述的一种可注射型同种异体脂肪脱细胞基质微粒的制备方法，其特征在于：

步骤（2）中的离心转速3000rpm~5000rpm，离心时间为3~10分钟。

5.一种脂肪脱细胞基质水凝胶，其特征在于：脂肪脱细胞基质水凝胶由权利要求1所述的制备方法制得到的脂肪脱细胞基质微粒进一步采用物理交联方法或化学交联方法制备而成；

所述物理交联方法为使用紫外光、电子束、γ射线辐射中的至少一种；

物理交联方法还包括将得到的脂肪脱细胞基质微粒在室温下用胃蛋白酶充分溶解，然后调节pH值为7.4，置于37℃形成凝胶的方法；

所述化学交联方法为交联剂碳化二亚胺、戊二醛、京尼平中的至少一种。