[发明专利]一种金刚烷胺在人类血浆动力学模型建立的方法

权利要求书

1.一种金刚烷胺在人类血浆中动力学模型建立的方法，其特征在于：具体步骤包括：

(1)处理血浆样品：取血浆样品到通用塑料离心管中，向血浆样品中加入提取液，涡旋混匀，离心，移取上清液，按以上操作重复提取，合并两次上清液备用，下层固渣废弃；

步骤(1)所述提取液是乙腈与甲醇体积比为2:1的溶剂。

(2)净化血浆样品：先后分别用甲醇和水进行固相萃取柱活化，将步骤(1)所得的上清液直接上样，然后淋洗，最后洗脱；采用氮气吹干仪吹干洗脱液，加入定溶液溶解，过0.22μm的滤膜，得到工作液，备用；

(3)标准工作溶液的配制：先将金刚烷胺用甲醇溶解，制备金刚烷胺内标溶液，备用；再采用甲醇溶液对步骤(2)所得工作液进行不同浓度的稀释，然后各浓度溶液加入金刚烷胺内标溶液，得到各浓度的标准工作液；

(4)液相色谱-串联质谱法的测定：将步骤(3)得到的各浓度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以各化合物的定量离子与内标校正离子峰面积之比的平均值(Y)对其质量浓度(X，ng/mL)绘制标准曲线。

2.根据权利要求1所述的金刚烷胺在人类血浆中动力学模型建立的方法，其特征在于：步骤(4)中的色谱条件为：

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱(100mm×2.1mm，3.5μm)；流动相A：5mmol/L乙酸铵水溶液；流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0min 75％流动相B；2.0min 60％流动相B；4.0min60％流动相B；4.2min5％流动相B；共运行8min；流速：0.3ml/min；柱温：30℃；进样体积：10μL；质谱条件为：离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子扫描；监测方式：动态多反应监测；气帘气：35psi；离子电压：5500V；碰撞气：氮气；干燥气温度：550℃；喷雾气(GS1)：55psi，辅助雾化器(GS2)：55psi。

3.根据权利要求2所述的金刚烷胺在人类血浆中动力学模型建立的方法，其特征在于：具体步骤还包括：

(5)评估回收率：在空白血浆中加入1ng/mL，2ng/mL和10ng/ mL的金刚烷胺控制样品采用步骤(1)和(2)进行处理，并采用步骤(4)进行上机测定分析，每个样品重复测定6次，计算各目标化合物的回收率；

(6)动力学实验：对20岁-40岁的健康志愿者口服金刚烷胺抗病毒药物后，0h、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、8.0h、12.0h、24.0h、48.0h采取健康志愿者的血浆，重复步骤(1)-步骤(4)，测定血浆中金刚烷胺的含量；

(7)评估方法的有效性：用1ng/mL，2ng/mL和10ng/mL三个添加浓度，来计算回收率，以评估所述方法的有效性；

(8)评估方法的可重复性：用1ng/mL，2ng/mL和10ng/mL三个添加浓度，每个平行测定6次，计算每组结果的相对标准偏差，以评估所述方法的可重复性；

(9)动力学实验中血浆样品的测定：按照步骤(1)-步骤(4)将采取的血浆样品进行测定，0h、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、8.0h、12.0h、24.0h、48.0h的血浆样品进行平行测定3次，取其平均值；

(10)数据处理：采用计算机origin8.0软件，分别对8h之前的吸收过程和8h之后的降解过程两组数据进行处理。

4.根据权利要求3所述的金刚烷胺在人类血浆中动力学模型建立的方法，其特征在于：步骤(10)所述数据处理是对数据采用一级指数函数、多项式回归分析、Rayleigh动态模型进行模拟处理。

5.根据权利要求3所述的金刚烷胺在人类血浆中动力学模型建立的方法，其特征在于：步骤(10)所述数据处理是对数据采用一级指数函数进行处理。

6.根据权利要求1所述的金刚烷胺在人类血浆中动力学模型建立的方法，其特征在于：步骤(1)所述离心时的条件是10000r/min离心6min。