[发明专利]利用液相色谱-离子淌度差分质谱联用技术定量分析福大赛因同分异构体的方法

说明书

本发明提供一种利用高效液相色谱‑离子淌度差分质谱串联装置定量分析福大赛因的四种同分异构体FD‑1、FD‑2、FD‑3和FD‑4的方法，所述方法包括以下步骤：1)制备福大赛因样品溶液；2)将所述样品溶液注入到高效液相色谱‑离子淌度差分质谱串联装置中，获得质量色谱图；3)根据所述质量色谱图使用外标法定量分析福大赛因的四种同分异构体FD‑1、FD‑2、FD‑3和FD‑4，其中，在所述高效液相色谱中使用由流动相A和流动相B组成的混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为pH值在9.5～11.5范围内的弱碱性水性流动相，所述流动相B为甲醇和乙腈的混合物。

技术领域

本发明涉及生物化学和药物分析化学领域，更具体地涉及一种利用液相色谱-离子淌度差分质谱定量分析福大赛因同分异构体的方法。

背景技术

光动力疗法(Photodynamic therapy，PDT)作为一种癌症治疗的新手段，近来得到了广泛的关注。光动力疗法的应用基于三个关键因素：光敏剂，特定波长的激光和氧气。

福大赛因是一种两亲性二磺酸基二邻苯二甲酰亚胺甲基酞菁锌二钾盐，由四种同分异构体FD-1，FD-2，FD-3和FD-4组成。

作为一种新型的抗癌酞菁类光敏剂，中国国家食品药品监督管理局(CFDA)于2008年6月批准了福大赛因的临床试验，目前正在进行II期临床试验。根据临床试验结果，福大赛因比已上市的光敏剂更有效地渗透到癌症组织中，在临床应用上具有很好的潜力。

而光敏剂的药物代谢动力学特征对于光敏剂临床应用，尤其是在优化激光治疗时间和给药后患者避免日光的时间方面都是非常重要的。而对于福大赛因而言，是将四种异构体混合物作为一个新型化学实体进行临床研究，在临床研究中考察这四种异构体之间是否存在药物代谢动力学差异是非常重要的，因此开发一种能够在生物基质中快速同时定量福大赛因四种同分异构体的分析方法，对于研究福大赛因的药物代谢动力学特征是尤为迫切的。

在现有技术中，只有使用高效液相色谱方法来分离分析福大赛因四种同分异构体的方法，而此方法分析时间长，特异性差且分析灵敏度较差，不能满足药物代谢动力学研究的要求。因此亟需开发一种快速、特异性、高灵敏度且高稳定性的定量分析方法来同时定量福大赛因的四种同分异构体。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用液相色谱-离子淌度差分质谱联用技术定量分析福大赛因同分异构体的方法。

本发明的一个方面涉及一种利用高效液相色谱-离子淌度差分质谱串联装置定量分析福大赛因的四种同分异构体FD-1、FD-2、FD-3和FD-4的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)制备福大赛因样品溶液；

2)将所述样品溶液注入到高效液相色谱-离子淌度差分质谱串联装置中，获得质量色谱图；

3)根据所述质量色谱图使用外标法定量分析福大赛因的四种同分异构体FD-1、FD-2、FD-3和FD-4，

其中，在所述高效液相色谱中使用由流动相A和流动相B组成的混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为pH值在9.5～11.5范围内的弱碱性水性流动相，所述流动相B为甲醇和乙腈的混合物。

在一个优选实施方案中，所述梯度洗脱程序的总时长不超过15分钟，优选不超过10分钟，其中起始流动相和最终流动相均为90％流动相A+10％流动相B，且流动相B的浓度梯度从30％变化到45％所用的时间为4.5min至6.0min。

在一个优选实施方案中，所述梯度洗脱程序为：

0.0至5.7min，10体积％至45体积％流动相B；5.7至6.5min，45体积％至90体积％流动相B；6.5至9.0min，90体积％至10体积％流动相B；