[发明专利]一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合及其应用和试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合及其应用和试剂盒，涉及病毒核酸检测的体外诊断技术领域。本发明公开的检测人乳头瘤病毒的核酸组合包括：SEQ ID NO.1‑6所示的引物和SEQ ID NO.7‑9所示的探针。该核酸组合可同时检测HPV 16和HPV 18且可对HPV16和HPV18特异性分型，同时还可通过内对照β‑globin基因检测结果对检测过程进行质量控制，降低假阴性，具有灵敏度高、特异性强的特点。

技术领域

本发明涉及病毒核酸检测的体外诊断技术领域，具体而言，涉及一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合及其应用和试剂盒。

背景技术

长期以来，细胞学筛查是宫颈癌筛查的唯一或主要方式，自1941年传统巴氏细胞学检测引入临床以来，宫颈癌的发病率和死亡率大大降低，尤其死亡率至少降低了70％，但巴氏细胞学涂片的准确性受诸多因素的影响，假阴性率较高，为5％-40％。近30多年来，细胞学筛查先后经历了检测技术与诊断方式的革命，即液基细胞学制片技术和计算机辅助细胞检测系统的应用完善，前者明显提高了细胞涂片质量，降低假阴性率至10％左右，提高了宫颈上皮高级病变及侵润癌的阳性检出率。后者减少了主观评判错误，为大规范筛查迈出了重要一步，但仍离不开细胞病理学专家的判断鉴别，且需特殊设备，开展受限。随着人们对人乳头瘤病毒(HPV)和宫颈病变关系认识的逐渐加深以及医学实验技术发展，HPV感染的检查方法也由组织细胞水平发展到分子水平，

HPV是一种嗜上皮性病毒。根据HPV致癌风险性大小，可将引起高度宫颈上皮内瘤变从而导致宫颈癌发生的HPV称为高危型HPV。2004年出版的《The Health Professional'sHPV handbook》指出高危型HPV有18种，分别为HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82。高危型HPV感染被视为几乎所有宫颈癌发生的必要条件，在99.7％的宫颈癌患者体内检测到高危型HPV DNA的存在，其中HPV16型、18型、45型和31型感染占80％。

目前国内临床主要的HPV检测的常见方法包括测序法、杂交捕获法、基因芯片法及荧光PCR法。测序法的结果相对准确，但操作繁琐，且对操作者的要求较高，不适于临床应用；杂交捕获法如Digene公司的Hybrid CaptureII已被美国FDA批准并已在临床上应用，检测时间长(DNA分离45min、DNA-RNA杂交60min、抗体捕获60min、化学发光30min、计算机判读15min一次实验一般要5～6小时)、灵敏度过低(3.5×10⁵copies/mL)、操作复杂、检测基因型少无法具体分型(仅13种高危型)且需要特定昂贵的仪器，成本高，和其检测外的高危型和低危型如HPV6、11等存在交叉反应，该法假阳性的问题仍然十分严重，且成本高。不宜在经济较不发达的发展中国家推广；基因芯片法类产品(如PCR-反向点杂交法、液态芯片法)虽然能对HPV具体分型，且检测基因型相对多，但其缺点是不能实现实时检测，需要扩增后产物分析操作，耗时长(4h以上)、易存在PCR产物污染、操作复杂、不能满足临床宫颈癌大量筛查的需求。而上世纪90年代中期在传统的PCR基础上发展起来的实时荧光PCR技术不但灵敏度高特异性强，自动化程度高，成本适中，几乎不会造成污染，这些优点无疑给人乳头瘤病毒的早期诊断带来了福音。

现有荧光PCR法HPV检测产品有以下缺点：1、现有荧光PCR产品不能在单管中实现18种高危型HPV分型，致使检测通量低且操作繁琐难以满足对大规模筛查要求。2、在单管中多数试剂盒检测少于18种高危型HPV，且不对HPV16、HPV18分型。

综上亟需能够实现快速、有效且准确检测HPV病毒型别的产品，以用于HPV病毒高低危型的全面的检测，HPV病毒相关性疾病的预测及治疗监测。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容