[发明专利]一种基于示差检测器测定牛磺酸含量的高效液相色谱法

说明书

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种基于示差折光检测器测定牛磺酸颗粒或牛磺酸滴眼液中牛磺酸含量的高效液相色谱方法。本发明所述基于示差折光检测器测定牛磺酸含量的高效液相色谱法，将高效液相色谱与示差折光检测器结合，建立直接测定牛磺酸含量的高效液相色谱示差检测器方法，以NH₂柱为分离柱，以示差折光显示器进行检测，整个检测过程，无需使用载气，无需对牛磺酸进行衍生处理，且无中间反应过程，线性范围宽，能够简便、快速、准确的直接测定牛磺酸含量，该方法可实现牛磺酸颗粒和牛磺酸滴眼液中牛磺酸含量的测定。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种基于示差折光检测器测 定牛磺酸颗粒或牛磺酸滴眼液中牛磺酸含量的高效液相色谱方法。

背景技术

牛磺酸(Taurine)，又称β-氨基乙磺酸，分子式为C₂H₇NO₃S，分子量 125.15，是一种含硫的非蛋白氨基酸，最早由牛黄中分离出来。牛磺酸分子 小，不具有苯基类基团，化学性质稳定，不溶于乙醚等有机溶剂，在体内 以游离状态存在，不参与体内蛋白的生物合成，但它却与胱氨酸、半胱氨 酸的代谢密切相关，是人及动物的重要营养物质。它以游离形式存在于哺 乳动物几乎所有的脏器中，在中枢神经系统中含量尤其丰富。牛磺酸具有 重要的生理作用，具有调节神经系统兴奋性、解热、镇痛，退烧、增强人 体抵抗力等作用，能促进大脑细胞发育、提高免疫力、缓解疲劳、调节神 经传导；此外，牛磺酸还具有重要的药理作用，具有消炎、解热、镇痛、 抗病毒之功效。牛磺酸颗粒是一种可用于缓解感冒初期发热的常用药物， 牛磺酸滴眼液可用于牛磺酸代谢失调引起的白内障疾病治疗。为有效控制 牛磺酸颗粒或牛磺酸滴眼液等牛磺酸制剂质量，有必要开发一种准确、方 便和有效的牛磺酸含量测定方法。

《中国药典》2015年版收载的牛磺酸原料药含量测定方法采用电位滴 定法；受限于牛磺酸紫外吸收度的限制，《中国药典》2015年版收载的牛 磺酸颗粒和牛磺酸滴眼液中的牛磺酸含量测定方法，均采用了在高效液相 中色谱柱后反应管内，以邻苯二甲醛对牛磺酸衍生化，利用衍生物中苯基 的紫外特征，用紫外检测器检测法间接测定牛磺酸的含量，该方法不仅需 要高效液相色谱中配备反应管，对设备要求较高，同时操作比较繁琐，对 反应过程，反应转化率难以有直观的判断，影响牛磺酸含量的准确性。国 家药品标准新药转正标准第42册收载的复方牛磺酸滴眼液质量标准中，采 用苯乙稀共聚体与磺基(Ca-配位)结合的凝胶为填充剂，水-乙腈(3：2) 为流动相，内消旋肌醇为内标物的高效液相色谱-示差折光检测器法，该方 法是在外标法的基础上，在样品和对照品里溶液中分别加入内消旋肌醇内标 物，通过对比内标物的峰面积或峰高的变化相对值得出样品中牛磺酸的含 量。但该方法相对外标法操作程序较为麻烦，要求分析时内标物和试样都 要准确称量，通常用于体系不稳定，操作条件变化误差大，或气相色谱中 载气进样体积难以掌握的情况，通过引入内标物消除体系的误差，以达到 其精确度满足检验要求。

近年来，文献报道了不同的牛磺酸的含量测定方法，主要有乙酰丙酮 显色反应后分光光度法、高效液相色谱-蒸发光散射检测法、质谱法等。电 位滴定法通常适用于不含干扰物质或杂质较少的原料药样品的测定，乙酰 丙酮显色反应后分光光度法，同样需要显色反应，操作繁琐，对反应过程， 反应转化率难以有直观的判断，影响牛磺酸测定的准确性；高效液相色谱- 蒸发光散射检测法原理是先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到 检测，需要高压氮气或空气作为载气，使用不便，载气稳定性，雾化过程， 待测样品的热稳定性都会影响测量的准确性；质谱法特异性强，准确度高， 但是费用昂贵，仪器操作复杂，常用于物质纯度、结构或未知样品的定性 或定量，但是其用于常规已知样品的日常检验，仪器使用成本及检验时间 成本相对较高，不利于常规检验室检验成本的节约和检验效率的提高。