[发明专利]一种用于检测甲型、乙型流感病毒的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于检测甲型/乙型流感病毒的试剂盒及其使用方法，该试剂盒包括检测管和阳性质控品；使用时，将样品DNA/RNA共提取模板、无RNase水、阳性质控品各25µL分别加入不同的检测管中，进行荧光PCR检测，再进行结果判读。综上所述，本发明与普通荧光PCR法、免疫法和细菌培养法等相比，具有以下优势：1.特异性强：本发明的引物探针针对甲型/乙型流感病毒的特异性保守区域序列设计，特异性强。2.敏感性高：本发明能检测到10copies/μL浓度的目的基因序列。3.易于保存：本发明的检测管内预装单管的干粉试剂，保存方便。4.单管分型：在一个检测管内根据荧光信号的不同来区分两种病毒。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于检测甲型/乙型流感病毒的试剂盒及其使用方法。

背景技术

流行性感冒病毒(influenza virus，Flu)，简称流感病毒，分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，近年来才发现的牛流感病毒将归为丁(D)型。流感病毒可引起人、禽、猪、马、蝙蝠等多种动物感染和发病，是人流感、禽流感、猪流感、马流感等人与动物疫病的病原。人流感主要是甲型流感病毒和乙型流感病毒引起的，主要引起上呼吸道感染，也可以引起儿童与成人的下呼吸道感染，主要为肺炎，婴幼儿的重症流感常伴有支气管炎、高热，偶尔伴有脑炎、中耳炎、心肌炎等并发症。流感病毒主要经空气飞沫传播，甲型流感病毒常以流行形式出现，可造成世界大流行；乙型流感病毒常造成局部爆发流行。利用分子诊断技术可以快速检测流感病毒，从而进行辅助诊断，对临床治疗有一定的指导意义。

主要的甲乙丙流感病毒中，甲型最容易引起流行，乙型次之，丙型极少引起流行。甲型流感病毒(Flu A)感染发病程度与个人免疫相关，典型症状以畏寒、持续高热、头痛为主，同时伴有喉痛、咳嗽、鼻塞，一般会有浑身酸痛、乏力等全身症状。发病率高、病死率底，死亡通常由并发细菌性感染所致。潜伏期1～7 天，甲型流感常引起大流行，每年均有一个高峰，病毒型别表现为交替流行的规律。文献报道流行期阳性检出率为20％～40％，而在非流行季节的阳性率为2％～20％。

乙型流感病毒(FluB)感染起病迅速，患者畏寒、发热，体温在数小时至 24小时内升达高峰，39～40℃甚至更高。伴有头痛，全身酸痛，乏力，食欲减退。呼吸道症状较轻，咽干喉痛，干咳，可有腹泻。颜面潮红，眼结膜外眦充血，咽部充血，软腭有滤泡等。潜伏期3～7天，乙型病毒常引起局限性流行，流感患者中，乙型流感病毒感染约占10％～40％。文献报道流行期间阳性率为10％～30％，在非流行季节阳性率2％～10％。

目前市场上针对甲型流感病毒和乙型流感病毒的检测方法主要有荧光PCR 法、免疫法和细菌培养法。荧光PCR法是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时监测，定性或定量检测目的基因；免疫法是通过抗原抗体发生特异性结合来检测目的蛋白；培养法是把病原体在特定培养基上进行培养，再对产生的结果进行观察分析。

目前市场上针对甲型流感病毒和乙型流感病毒的荧光定量PCR检测试剂盒有很多，针对甲型流感病毒和乙型流感病毒最为常见的一些亚型设计引物探针进行检测。其组成一般包括盐离子缓冲液、酶、引物、探针、质控品，以液态形式分管保存在-20℃下，使用时需要将多管试剂融化，按照一定的比例进行混合，配制成检测反应液，然后加入样本核酸，放入荧光定量PCR仪中进行检测，最后根据扩增曲线分析检测结果。

免疫法检测试剂针对的是样本中的抗原或者抗体，且抗体检测有窗口期，在发病初期容易漏诊；免疫法检测灵敏度、特异性较低，样本易污染且干扰物质较多，浓度过高或者过低时都容易造成结果错判，需要重复检测、复查才能确诊，检测的可信度较差；采用培养法检测耗时较长，培养效果差，很多病原体无法培养，延误最佳治疗时机。