[发明专利]L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶及其在催化合成稀有糖D-山梨糖中的应用有效
| 申请号： | 201810209650.5 | 申请日： | 2018-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN108410850B | 公开（公告）日： | 2021-05-18 |
| 发明（设计）人： | 高晓冬;李子杰;汪马燕 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12P19/02 |
| 代理公司： | 南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 王晓东 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 李树 磷酸 醛缩酶 及其 催化 合成 稀有 山梨 中的 应用 | ||
1.定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶，其特征在于：所述定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶由基因序列SEQ ID NO.1编码的野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶分别经过其氨基酸第115、116、148、188或152位饱和定点突变而产生的突变体，所述突变体为L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶的突变体Y152W、突变体Y152Q、突变体Y152N、突变体P188Y、突变体T115A、突变体S116A、突变体I148A。
2.如权利要求1所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶，其特征在于：所述由SEQ ID NO.1编码的野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶来源于大肠杆菌MG1655菌株。
3.DNA分子，其特征在于：所述DNA分子编码权利要求1所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶。
4.质粒载体，其特征在于：所述质粒载体装载了权利要求3所述的DNA分子。
5.如权利要求4所述的质粒载体，其特征在于：所述质粒载体为在pET-28a载体上装载了权利要求3所述的DNA分子。
6.权利要求1或2所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖D-山梨糖中的应用。
7.权利要求1或2所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶的制备方法，其特征在于：包括，
构建突变株重组质粒：将野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因片段连接到质粒载体上，得到野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因重组质粒，以所述野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因重组质粒为模版，对L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因编码氨基酸分别进行第115、116、148、188或152位氨基酸饱和定点突变，分别得到突变株重组质粒；
突变株表达：将所述突变株重组质粒转化大肠杆菌，挑选单菌落接种，IPTG 16℃诱导表达定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：还包括，
蛋白纯化：将经过所述突变株表达的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶进行纯化。
9.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于：所述质粒载体为pET-28a载体，所述突变株重组质粒包括pET28a-rhaDT115A、pET28a-rhaDS116A、pET28a-rhaDI148A、pET28a-rhaDP188Y、pET28a-rhaDY152W、pET28a-rhaDY152Q、pET28a-rhaDY152N，所述将突变株重组质粒转化大肠杆菌，为转化大肠杆菌BL21菌株。
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