[发明专利]白洗猪LYRM1基因CDS区的克隆方法

权利要求书

1.一种白洗猪LYRM1基因CDS区的克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：将白洗猪皮下脂肪组织RNA经逆转录获得白洗猪的cDNA，将白洗猪的cDNA经引物PCR扩增获得获得LYRM1基因的CDS区序列，将扩增后产物胶回收后与Pucm-T载体连接，转化进入TOP10感受态细胞进行培养，蓝白斑筛选，选取白色菌落LB液体培养基扩培，PCR检测验证，质粒提取测序验证。

2.根据权利要求1所述的白洗猪LYRM1基因CDS区的克隆方法，其特征在于：所述的引物包括上游引物F和下游引物R，其序列分别为；

上游引物F的序列：5’-ATGACAACGGCAACACGACAA-3’；

下游引物R的序列：5’-GGAAACCTCATCGTGAGACTG-3’。

3.根据权利要求1所述的白洗猪LYRM1基因CDS区的克隆方法，其特征在于：所述的PCR反应体系为：所述的PCR扩增的反应总体系20ul:上、下游引物各1.0μL，模板cDNA 1.0μL，2×Es Taq MasterMix 10μL，ddH2O 7μL，PCR的反应条件为：95℃预变性5min；{95℃变性30s，57℃退火15s，72℃延伸30s}×35个循环；72℃终延伸5min，4℃保存。

4.根据权利要求1所述的白洗猪LYRM1基因CDS区的克隆方法，其特征在于：用质量百分比为1.5％的琼脂糖凝胶对PCR产物进行电泳检测，切胶回收目的条带和Pucm-T载体连接；连接体系：Pucm-T载体1ul，目的片段5ul，buffer 1ul，T4DNA连接酶1ul，ddH₂O 1ul；将反应混合物在16℃金属浴连接过夜；将反应产物连接到100ul感受态细胞中，培养后选取白色单菌落分别加入盛有AMP抗性的LB液体培养基中，37℃摇床振荡培养12h～16h PCR检测菌液阳性克隆，提取重组质粒测序验证。