[发明专利]黑根霉胞外多糖在制备治疗诱发性结肠癌药物中的应用

说明书

本发明提供了黑根霉胞外多糖在制备治疗诱发性结肠癌药物中的应用。黑根霉胞外多糖是黑根霉经活化、发酵培养、乙醇沉淀、Sevage法脱蛋白、大孔树脂脱色等进一步分离纯化获得。本发明利用黑根霉胞外多糖通过建立AOM/DSS诱导性结肠癌小鼠模型和DMH诱导性大鼠结肠癌模型对黑根霉胞外多糖的抗肿瘤活性进行探究。动物模型实验结果表明：黑根霉胞外多糖可以明显抑制诱发性结肠癌小鼠肿瘤的生长和发展，并对诱导性结肠癌有显著预防和治疗作用。同时可以提高小鼠健康状态、小鼠成活率，延缓死亡。

技术领域

本发明涉及黑根霉胞外多糖在制备治疗诱发性结肠癌药物中的应用，属于医药及保健食品技术领域。

背景技术

癌是指起源于上皮组织的恶性肿瘤。近年来随着人们生活水平的提高，以及生活方式的改变使得癌症的发病率也逐渐升高。癌症已成为全球第二大死因，其中，结肠癌是发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类。2015年中国癌症统计数据显示，我国结直肠癌发病率和病死率在全部恶性肿瘤中均居前5位，并呈逐年快速上升态势，已严重危害人民健康。

目前结肠癌治疗的主要手段是采用化学疗法结合药物治疗、手术等，这些治疗手段都可以在一定程度上控制病情，但往往伴随着很大的副作用，会给病人带来很大的痛苦。临床上的化疗药物在杀死癌细胞的同时也会损伤机体正常细胞的功能，产生很大的毒副作用，严重降低癌症病人的生存质量，并且上述化学疗法价格昂贵，预后性差。因此，寻找一种新型的，价格低廉且疗效显著的预防和治疗结肠癌的药物或辅助药物十分重要。

多糖是由糖苷键结合的糖链，至少要超过10个的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物。其中，真菌多糖是一种天然大分子活性多糖，真菌多糖抗肿瘤药物是抗肿瘤药物的重要组成成分。多项研究表明，真菌多糖具有免疫调节、抗病毒、抗癌、降血糖、抗衰老等功效且毒性小，安全性高，副作用低。近年来，真菌多糖的抗肿瘤活性研究受到越来越多的关注。例如，银耳孢多糖能明显降低结肠肿瘤瘤重,降低肿瘤组织中VEGF-C mRNA和survivin、VEGF-C蛋白含量；猴头菇多糖能抑制肿瘤生长，促进消化道溃疡和各种慢性胃炎的修复。并且，香菇多糖，云芝多糖等作为抗肿瘤辅助药物已应用于临床研究。

除此之外，研究发现许多霉菌发酵液也可提取活性多糖，且具有多种生物活性，更有成本低廉，操作简便等优势。开发抗肿瘤作用的霉菌多糖药物和保健品已经成为多糖研究的热点。

黑根霉是一种接合菌门丝状真菌，具有优异的生物转化功能。黑根霉胞外多糖是黑根霉经液体发酵后进一步分离纯化获得的一种活性多糖。目前，黑根霉胞外多糖活性研究日趋重要，但黑根霉胞外多糖对诱发性结肠癌的抑制作用尚未报道。

发明内容

本发明针对现有抗结肠癌类肿瘤药物的不足，目的是提供一种黑根霉胞外多糖的新应用，具体涉及黑根霉胞外多糖在制备治疗诱发性结肠癌药物中的应用。

一种黑根霉胞外多糖在制备治疗诱发性结肠癌药物中的应用，其特征在于，所述的黑根霉胞外多糖的制备方法如下：

(1)取菌种保藏号为CGMCC N0.8436的黑根霉菌种接种于PDA培养基中，28±0.5℃活化2-3天后转接至PDB培养基中，在28±0.5℃，100-150rpm/min条件下，连续培养10-12天得发酵液；

(2)将制备的发酵液以抽滤方法除去菌丝和孢子进行固液分离，将分离后的液体浓缩至原有培养液体积的1/3-1/2；离心收集浓缩液，在收集的浓缩液中加入其3倍体积的无水乙醇静置过夜；离心收集沉淀并用蒸馏水充分溶解，取上清液得粗提液；

(3)将步骤(2)制备的上清液流过装有D301-R型树脂的脱色柱，每次上样200mL，流速为420μL/min，收集脱色后的澄清液；

(4)在步骤(3)制备的澄清液中加入总体积1/4的Sevege试剂置于恒温混匀振荡器中反复多次除去蛋白质，之后以蒸馏方法除去澄清液中的有机溶剂，得到粗多糖溶液；