[发明专利]一种检测谷胱甘肽的方法和硫金复合物的应用

说明书

本发明公开了一种检测谷胱甘肽的方法和硫金复合物的应用。检测谷胱甘肽(GSH)的方法包括以下步骤：将氯金酸溶液与带有巯基的多肽溶液混合，反应1—3min，得到含硫金复合物的溶液；将含硫金复合物的溶液与荧光基团标记的DNA探针孵育，孵育条件为：在温度20—40℃、pH值为中性的条件下孵育1—3min；得到硫金复合物‑DNA探针；在得到的硫金复合物‑DNA探针中加入不同浓度的谷胱甘肽，用荧光光谱仪检测，根据荧光信号的强弱实现对GSH的检测。本发明检测方法在构建传感界面、增强传感响应的灵敏度具有独特的性能，具有简便、快速、免抗体识别等优异性质，是一种简便、快速、灵敏检测GSH的新方法。

技术领域

本发明涉及一种检测谷胱甘肽的方法和硫金复合物的应用。

背景技术

谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合，含有巯基的三肽，分布所有器官细胞内。GSH主要参与氨基酸的转运，蛋白、核酸的合成，抗氧化作用，维持蛋白巯基的还原状态，维持酶的活性状态，保护细胞防止自由基、毒素的损伤等等。GSH具有抗氧化作用和整合解毒作用。其含量的异常可以作为HIV，帕金森综合征，肝损伤，炎症等疾病的诊断指标之一。因此，快速、简便、准确的测定谷胱甘肽的含量，对于研究GSH的生理学意义、疾病的诊断有非常重要的意义。目前现有的GSH检测方法多数需要较长的酶催化反应时间，涉及大型仪器的操作和使用。新开发的荧光检测方法需要合成具有荧光性质的纳米材料，合成时间长，对操作者要求较高。

发明内容

鉴于上述检测的瓶颈，我们发现了硫金复合物可以高效地淬灭荧光基团的荧光，而GSH可以打断硫金复合物中的Au-S键，实现荧光的恢复。利用这一新的识别机制结合金的复合材料的荧光淬灭性质，构建了免抗体识别传感器，有效实现了GSH的检测。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

提供一种检测谷胱甘肽的方法，包括以下步骤：

(1)将氯金酸溶液与带有巯基的多肽溶液混合，反应1—3min，得到含硫金复合物的溶液；

(2)将步骤(1)的含硫金复合物的溶液与荧光基团标记的DNA探针孵育，孵育条件为：在温度20—40℃、pH值为中性的条件下孵育1—3min；得到硫金复合物-DNA探针；

(3)在步骤(2)得到的硫金复合物-DNA探针中加入不同浓度的谷胱甘肽，用荧光光谱仪检测，根据荧光信号的强弱实现对GSH的检测。

优选地，在pH值为中性条件下，所述多肽为带正电的多肽。多肽中可以含有精氨酸(R)、赖氨酸(K)，使多肽在检测条件下(pH 7.0)显示正电。

优选地，所述多肽为等电点为8—12的多肽。

优选地，所述多肽为精氨酸-半胱氨酸-谷氨酸构成的三肽(精氨酸-半胱氨酸-精氨酸、赖氨酸-半胱氨酸-谷氨酸、赖氨酸-半胱氨酸-精氨酸等)。

优选地，步骤(1)中氯金酸溶液的浓度为0.5—2mmol/L；步骤(1)中多肽溶液的浓度为1—4mmol/L。

优选地，步骤(1)中氯金酸溶液与多肽溶液等体积混合。

优选地，步骤(3)中选取荧光光谱仪的激发波长为450nm—490nm。

作为一个总的发明构思，本发明还提供一种硫金复合物-DNA探针的制备方法，包括以下步骤：

(1)将氯金酸溶液与带有巯基的多肽溶液混合，反应1—3min，得到含硫金复合物的溶液；

(2)将步骤(1)的含硫金复合物的溶液与荧光基团标记的DNA探针孵育，孵育条件为：在温度20—40℃、pH值为中性的条件下孵育1—3min；得到硫金复合物-DNA探针。