[发明专利]一种检测久效磷的时间分辨荧光试纸条及其应用

权利要求书

1.一种检测久效磷的时间分辨荧光试纸条,包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫，其特征在于所述反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端；所述样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有久效磷时间分辨荧光微球；所述反应膜上设有为T线的检测线和为C线的质控线，T线接上包被久效磷抗原，C线包被抗兔抗体，所述久效磷抗原是久效磷半抗原-载体蛋白偶联物，所述久效磷半抗原的制备方法如下：

将1g三乙胺溶于20mlDMF中，室温搅拌，加入久效磷2.2g，溶解后加入1.2g丁二酸酐，搅拌10h，加入100ml去离子水，100mlX3次乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压去溶剂，柱层析纯化，得到目标物2.7g，收率83％。

2.如权利要求1所述的检测久效磷的时间分辨荧光试纸条，其特征在于所述久效磷半抗原的分子结构式为：

3.如权利要求1所述的检测久效磷的时间分辨荧光试纸条，其特征在于，所述久效磷时间分辨荧光微球，包括检测微球和质控微球，检测微球为表面包被有久效磷单克隆抗体的荧光微球，质控微球为表面包被有兔抗标记蛋白的荧光微球。

4.如权利要求1所述的检测久效磷的时间分辨荧光试纸条，久效磷单克隆抗体是以久效磷半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述免疫原的制备方法如下：

将133mg BSA溶于5ml 0.01M PBS，搅拌溶解；加入22mg久效磷半抗原，加入EDC盐酸盐10mg，室温搅拌6h；移入透析袋中透析48h。

5.如权利要求1所述的检测久效磷的时间分辨荧光试纸条，所述包被原的制备方法如下：

将86mg OVA溶于5ml 0.01M PBS，搅拌溶解；加入17.6mg久效磷半抗原,加入EDC盐酸盐10mg，室温搅拌6h；移入透析袋中透析48h。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述试纸条的方法，其包括步骤：

1)制备喷涂有久效磷单克隆抗体-时间分辨荧光标记物的样品吸收垫；

2)制备具有包被有久效磷半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有抗兔抗体的质控线的反应膜；

3)将1)和2)制备好的样品吸收垫、反应膜以及吸水垫组装成试纸条。

7.一种检测苹果、玉米、黄瓜、西红柿、萝卜叶、白菜样品中久效磷残留的方法，其包括步骤：

1)样本前处理；

2)用权利要求1-6任一项所述的试纸条进行检测；

3)分析检测结果。