[发明专利]一种检测久效磷的时间分辨荧光试纸条及其应用

说明书

本发明公开了一种检测久效磷的时间分辨荧光试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫，反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端；样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有久效磷时间时间分辨荧光微球；反应膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)，T线接上包被久效磷抗原(包被原)，C线包被抗兔抗体。本发明还提供了一种应用上述久效磷试纸条检测苹果、玉米、黄瓜、西红柿、萝卜叶、白菜等样品中久效磷残留的方法。本发明所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、定量检测、快速检测、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

技术领域

本发明涉及一种检测久效磷的时间分辨荧光试纸条及其应用，属于时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术领域，用于苹果、玉米、黄瓜、西红柿、萝卜叶、白菜等样品中久效磷的含量检测。

背景技术

久效磷是一种高效有机磷杀虫剂，具有很强的触杀和胃毒作用。杀虫谱广，速效性好，残留期长，对刺吸、咀嚼和蛀食性的多种害虫有效，久效磷还有一定的杀卵作用，适用于防治棉花、水稻、大豆等作物上的多种害虫。久效磷对鱼类及水生动物有毒，对鸟类毒性高，对蜜蜂高毒。随着该农药的应用日益广泛，必然会造成对蔬菜及其他作物的污染。因此，我国相关质检部门对该物质进行了限量规定。GB 2763-2016《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》规定了久效磷的最大残留限量：谷物(稻谷、麦类、旱粮类、杂粮类)0.02mg/kg，油料和油脂(棉籽油)0.05mg/kg，蔬菜中叶菜类、瓜类、茄果类、豆类、茎类等均为0.03mg/kg，水果中柑橘类、仁果类、核果类、瓜果类等均为0.03mg/kg。

目前，检测久效磷的方法有气相色谱法、薄层色谱法、反相高效液相色谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法等。仪器检测方法的精确度较高，但是仪器昂贵，需要专业的技术人员，检测步骤复杂，难以批量检测样品，不适用于基层实验室批量、快速检测样品。而免疫学检测方法操作简单、快速、灵敏，可同时检测多数样品，是理想的快速筛选手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的久效磷时间分辨荧光试纸条。

本发明所提供了一种久效磷时间分辨荧光试纸条，该试纸条包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫三部分。反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端。其中，样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有时间分辨荧光微球；反应膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)，T线接上包被久效磷抗原，C线包被抗兔抗体。

所述久效磷时间分辨荧光微球，包括检测微球和质控微球，检测微球为表面包被有久效磷单克隆抗体的荧光微球，质控微球为表面包被有兔抗标记蛋白的荧光微球。

所述荧光微球中填充了斓系元素化合物；较优的，该斓系元索鳌合物为铕鳌合物；最优的，该铕鳌合物可为Eu(TTA)3/TOPO或Eu(TTA)3/Phen。

所述蛋白可以是牛血清Y-球蛋白(BGG)或小牛血清白蛋白(BSA)。

所述时间分辨荧光微球粒径范围为100-1000nm。

所述硝酸纤维素膜上，T线上包被的抗体为久效磷抗原，C线上包被的抗兔抗体。

所述久效磷时间分辨荧光免疫定量检测试纸条底部设有塑料底板。

所述T线接上包被久效磷抗原是由久效磷半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述久效磷单克隆抗体是以久效磷半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由久效磷单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述抗兔抗体是将兔源抗体免疫羊得到。

所述样品吸收垫为Fusion5膜或其他功能相同的膜；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水垫；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。