[发明专利]一种温度＆还原双敏感载药Pluronic F127基纳米胶束的制备方法

说明书

本发明涉及一种温度&还原双敏感载药Pluronic F127基纳米胶束的制备方法，包括：羧基化的HOOC‑F127‑COOH制备，载有Bufalin的HOOC‑F127‑COOH纳米胶束制备，交联的载药Pluronic F127基纳米胶束制备。本发明使用的Pluronic F127、马来酸酐和胱胺二盐酸盐都是生物相容性非常好的生物材料，不会对机体产生毒性；本发明的新型载药材料具有温度敏感的特点用于提高胶束的载药量以及响应癌细胞内微环境实现还原型释放的特点，可以用于抗肿瘤研究，有着很好的实用价值。

技术领域

本发明属于肿瘤微环境响应性纳米材料制备领域，特别涉及一种温度&还原双敏感载药Pluronic F127基纳米胶束的制备方法。

背景技术

蟾毒灵是一种作用于心脏的甾族化合物，它是传统中药华蟾素注射液中具有抗肿瘤作用的主要活性成分之一。蟾毒灵已经被证实具备很强的抗肿瘤效果，包括：抑制癌细胞的增殖，诱导癌细胞分化，诱导癌细胞凋亡，破坏细胞生长周期，抑制肿瘤血管再生等。同时，蟾毒灵参与了复杂的细胞信号传导途径，实现了对癌细胞增殖的选择性控制，正常细胞却不受影响，从而实现了对癌细胞的靶向杀灭。蟾毒灵也是甾体受体共激活因子SRC-1和SRC-3的抑制剂，赋予了蟾毒灵以纳摩尔级的浓度便可抑制癌细胞的生长。

三嵌段共聚物Pluronic F127作为药剂无生理活性，无溶血性，对皮肤无刺激性，毒性小，已被美国食品药品监督管理局批准，由于其具备温度响应的临界胶束浓度，因此，PluronicF127基于温度的变化很容易自组装形成胶束或解体。基于此特性，Pluronic F127形成的胶束用来包载一系列的疏水性药物。为了提高载药胶束的胶体稳定性，防止药物未到达肿瘤靶位置的提前释放，可以使用胱胺对胶束进行表面交联，这样不仅提高了胶束的稳定性，同时响应癌细胞高的还原电位实现药物的靶向释放。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种温度&还原双敏感载药Pluronic F127基纳米胶束的制备方法，该方法操作简单，反应条件温和，通过温度敏感提高了胶束的载药量，还原敏感实现了药物的靶向释放，所制备的双敏感载药胶束对靶向治疗癌症展现出了广阔的前景。

本发明的一种温度&还原双敏感载药Pluronic F127基纳米胶束的制备方法，具体步骤如下：

(1)将马来酸酐加入到含吡啶的Pluronic F127溶液中，在氮气保护下反应，提纯，透析，冷冻干燥，得到羧基化的HOOC-F127-COOH，其中马来酸酐与Pluronic F127的摩尔比为8:1-12:1；

(2)将步骤(1)中HOOC-F127-COOH和蟾毒灵Bufalin以质量比为5:1-15:1溶解于溶剂中，搅拌，蒸发溶剂，得到聚合物药膜，用去离子水水化，涡旋，4℃条件下继续搅拌反应过夜，37℃条件下透析，冷冻干燥，得到载有Bufalin的HOOC-F127-COOH纳米胶束，其中蟾毒灵与溶剂的质量比为1:500-1:300，HOOC-F127-COOH与去离子水的质量比为1:50-1:30；

(3)将步骤(2)中载有Bufalin的HOOC-F127-COOH纳米胶束分散到溶剂中，加入NHS和EDC·HCl，氮气保护下活化过夜，然后加入胱胺二盐酸盐反应，透析，冷冻干燥，得到交联的载药Pluronic F127基纳米胶束，其中步骤(2)中HOOC-F127-COOH、NHS、EDC·HCl和胱胺二盐酸盐的摩尔比为1:1-3:1-3:1，步骤(2)中HOOC-F127-COOH与溶剂的质量比为1:300-1:200。

所述步骤(1)中含吡啶的Pluronic F127溶液的溶剂为甲苯，甲苯与吡啶的体积比为18:1-22:1。

所述步骤(1)中反应的温度为室温，反应的时间为7-9h。

所述步骤(1)中提纯具体为：用甲醇溶解，然后用冰乙醚沉淀，重复3-4次。