[发明专利]猫杯状病毒单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供了具有特异性结合猫杯状病毒的鼠单克隆抗体的可变区序列、特异性结合猫杯状病毒的抗体以及分泌抗体的杂交瘤细胞，该可变区序列能特异性结合猫杯状病毒，且对多种猫杯状病毒均能结合。该抗体制备的双抗夹心检测试剂盒能对临床上的多种FCV毒株均能检测，克服了现有技术检测FCV毒株广谱性差、灵敏度低的问题，避免了漏检、假阴性现象发生，特别地检测无症状的动物多种类型的靶标准确率更高，具有快速、简便、准确的优势。

技术领域

本发明涉及两种猫杯状病毒单克隆抗体，以及含单克隆抗体对的双抗夹心检测试剂盒和应用，属于生物技术领域。

背景技术

猫杯状病毒(Feline calicivirus，FCV)属于杯状病毒科，可引发猫科(以猫为主)的上呼吸道感染、口腔水泡性疾病及慢性肠胃炎，还可引发猫肺炎、跛性综合征等疾病。FCV所引发的疾病发病率极高，呈世界性分布，极易感染一岁内的幼猫，导致幼猫死亡。FCV传播途径广泛，主要传染源为病猫和带毒猫，病猫在急性期可随分泌物和排泄物排出大量病毒，直接传染易感猫；带毒猫经治疗，症状可消失，临床康复后作为无症状的病原携带者仍可长期排毒，也是危险的传染源。

FCV与猫疱疹病毒1型引发疾病的临床症状相似并经常混合感染，还可与其它病毒、寄生虫混合感染。而仅根据病史、临床症状和流行特点进行诊断常常误诊，从而延误时机并导致病毒的进一步扩散和传播。

FCV常用的检测方法包括电镜观察技术、病毒分离、中和试验、免疫荧光试验、RT-PCR等，操作繁琐、检测耗时，需要专业技术人员和专门仪器方可完成。特别是FCV具有丰富的抗原多样性，遗传变异性也很强，这成为FCV感染准确诊断和有效防制的一大难题。近年来，由于FCV高度变异性产生的强毒株可引起严重、急性、致死性、全身性疾病，对猫群及其它猫科动物的健康构成严重威胁。而现有产品无法准确检测FCV强毒株，为面对这种严峻局势，急需建立一种快速、准确、简单、广谱的诊断FCV方法。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了两株猫杯状病毒单克隆抗体，其能特异性、广谱性地结合猫杯状病毒。

本发明涉及一种特异性结合猫杯状病毒的单克隆抗体5D9的可变区序列，其中，1)重链可变区氨基酸序列为SEQ.ID No.1编码的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；2)轻链可变区氨基酸序列为SEQ.ID No.2编码的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。

本发明的单克隆抗体5D9的可变区序列能特异性结合猫杯状病毒，对早期毒株、现在流行株均能特异性结合，其针对的抗原表位位于Cap蛋白上；且其能针对现在流行毒株广谱性地结合。

本发明还涉及具有上述可变区序列的抗体或其片段，所述抗体或其片段具有特异性、广谱性地结合猫杯状病毒的能力。

本发明还涉及一种杂交瘤细胞5D9株，所述杂交瘤细胞5D9株分泌所述单克隆抗体5D9。

本发明还涉及一种特异性结合猫杯状病毒的鼠单克隆抗体5F5的可变区序列，其中，1)重链可变区氨基酸序列为SEQ.ID No.3编码的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；2)轻链可变区氨基酸序列为SEQ.ID No.4编码的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。

本发明的单克隆抗体5F5的可变区序列能特异性结合猫杯状病毒，对早期毒株、现在流行株均能特异性结合，其针对的抗原表位位于Cap蛋白上；且其能针对现在流行毒株广谱性地结合。

本发明还涉及具有上述可变区序列的抗体或其片段，所述抗体或其片段仍具有特异性、广谱性地结合猫杯状病毒的能力。

本发明还涉及一种杂交瘤细胞5F5株，所述杂交瘤细胞5F5株分泌所述单克隆抗体5F5。