[发明专利]一种提高重组大肠杆菌中1,2,4-丁三醇产量的方法

权利要求书

1.一种生产1,2,4-丁三醇的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1:以E.coli W3110基因组为模板，利用核苷酸序列如SEQ ID NO.9-10所示的反义RNA引物对克隆相应的xylA基因片段，获得核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的反义RNA片段asRNA3；

步骤2:利用酶切、连接分子操作技术将克隆片段与发夹结构连接，然后将携带发夹结构的反义RNA片段反向插入到表达载体pEtac-mdlC-tac-xdh的lac启动子后，获得反义RNA重组表达载体pEtac-mdlC-tac-xdh-lac-asRNA3；

步骤3:将重组表达载体导入E.coli W3110ΔyagEΔyjhHΔyiaEΔycdW感受态细胞中，获得能够抑制木糖异构酶表达的产1,2,4-丁三醇重组大肠杆菌。

2.权利要求1构建得到的生产1 ,2 ,4-丁三醇的重组大肠杆菌，其特征在于，是利用核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的反义RNA asRNA3部分抑制木糖异构酶基因xylA的表达；所述重组大肠杆菌是以E.coli W3110ΔyagEΔyjhHΔyiaEΔycdW为出发菌株，将携带核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的反义RNA asRNA3的重组表达载体转入大肠杆菌；所述重组表达载体是以pEtac-mdlC-tac-xdh为出发质粒，构建的用于表达反义RNA的表达载体：pEtac-mdlC-tac-xdh-lac-asRNA3。

3.应用权利要求2所述的重组大肠杆菌生产1,2,4-丁三醇的方法。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，以木糖为碳源。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，将种子培养液接种于发酵培养基中，所述发酵培养基含1.5倍浓度的LB培养基、30 g/L木糖、10 g/L CaCO₃；待培养至OD₆₀₀接近0 .6时加入IPTG诱导培养。