[发明专利]一种重金属抗性微生物的筛选方法

权利要求书

1.一种重金属抗性微生物的筛选方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

(a)采集被重金属污染的原位土壤，并将其分为两份，其中一份进行预处理后获得所述原位土壤的浸提液，在该浸提液中添加三羧酸循环底物为微生物提供通用碳源，以此获得培养基基液，其中，所述浸提液在添加三羧酸循环底物的前后pH值不变，将所述培养基基液分为两部分，一部分经高压蒸汽灭菌后保存作为液体培养基，另外一部分用于制备固体培养基；

其中，所述三羧酸循环底物采用琥珀酸或苹果酸；

(b)采用稀释法将另外一份原位土壤中的微生物分离后涂布在所述固体培养基上，由此在该固体培养基上获得多个单菌落，从多个单菌落中挑选出所需的菌落并接种到所述液体培养基中培养，然后保存，至此完成微生物的筛选。

2.如权利要求1所述的一种重金属抗性微生物的筛选方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述预处理包括下列子步骤，

(a1)将所述原位土壤过筛去除杂质；

(a2)将过筛后的原位土壤溶解在去离子水中形成悬浊液；

(a3)将所述悬浊液进行高压蒸汽灭菌，使得所述原位土壤中的可溶性营养物质和重金属充分溶解，以获得接近原位土壤的营养条件和重金属胁迫的土壤初提液；

(a4)将步骤(a3)中获得的土壤初提液分别依次采用棉布和滤纸过滤，过滤后的溶液即为所述原位土壤的浸提液。

3.如权利要求1或2所述的一种重金属抗性微生物的筛选方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述高压蒸汽灭菌的温度为121℃，时间为15min～30min。

4.如权利要求2所述的一种重金属抗性微生物的筛选方法，其特征在于，在步骤(a3)中，所述高压蒸汽灭菌的的温度为121℃,时间为不少于30min。

5.如权利要求1所述的一种重金属抗性微生物的筛选方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述培养基基液中的三羧酸循环底物的浓度为3g/L～10g/L。

6.如权利要求1所述的一种重金属抗性微生物的筛选方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述稀释法包括下列子步骤：

(b1)将所述原位土壤溶解在无菌水中，并加入无菌玻璃珠震荡形成悬浊液，以此使得微生物群落充分分散于水中；

(b2)取步骤(b1)获得的悬浊液的上清液，在该上清液中加入去离子水进行充分稀释，由此形成稀释液；

(b3)将所述稀释液涂布在所述固体培养基中培养，从而在该固体培养基上获得多个分散的单菌落。