[发明专利]一种乳酸菌的共价包埋方法及乳酸菌制剂

说明书

本申请提供一种乳酸菌的共价包埋方法，所述方法在菌体中添加凝乳酶和谷丙酰胺转氨酶等共价包埋剂，使菌体表面的添加剂发生共价交联反应，经过乳化后，将菌体包埋于囊状结构中，并在囊状结构中形成非常稳定的微环境，避免菌体在冻干过程中受到损伤。本申请还提供一种使用所述方法制备的植物乳杆菌LP6的冻干粉。

技术领域

本发明属于微生态制剂领域，具体涉及一种乳酸菌共价包埋方法。

背景技术

早在70年代，欧美一些发达国家相继开发研制新型微生态制剂，希望在一定程度上替代抗生素，并起到调节人体免疫力的效果。近些年，伴随我国消费者对微生态制剂认识的不断加深，乳酸菌微生态制以其调理胃肠道和提高免疫力方面的显著优势，越来越受到人们的关注。

乳酸菌微生态制剂在投放市场前，通常经过真空冷冻干燥处理。但在实际的生产过程中，传统的真空冷冻干燥技术，在冷冻初期降温过程较为缓慢，由于细胞外部环境中存在多种溶剂以及无机盐，其中，冰点低的溶剂先结晶，冰点低的溶剂后结晶，而体系中的无机盐不结晶，这就导致细胞外部环境的液相浓度越来越大，逐渐转变为玻璃态，从而导致细胞外部环境的渗透压逐渐增大，进而导致细胞内的细胞质发生变化，并且，细胞间及细胞内的冰晶无规则排列，细胞间的压力直接作用在细胞质膜上，改变了细胞质膜的流动性以及其他物理和化学性质，还可能刺破细胞膜。这些因素综合导致细胞膜会遭受氧化损伤，使得乳酸菌自身对外界环境的抗性较差，生物活性逐渐丧失，从而导致乳酸菌固体食品货架期较短，严重制约乳酸菌系列产品的生产、销售和应用。

因此，寻求一种可提高乳酸菌常温条件下贮藏稳定性的加工工艺已经迫在眉睫。

发明内容

本申请的目的之一是提供一株分离的植物乳杆菌菌株，所述植物乳杆菌菌株LP6(Lactobacillus plantarum LP6)，通过以下方法筛选得到：

分离自传统自然发酵的泡菜中，经无菌水适度稀释并涂布于选择性MRS固体培养基，37℃厌氧培养72h。挑取典型菌落进行革兰氏染色镜检挑选后，再划线于MRS固体培养基2-3次培养得到纯菌落。经生理生化鉴定结合16s rRNA分子鉴定为1株植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌LP6(Lactobacillus plantarum LP6)，该菌株已于2017年9月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心。

本申请将该菌株提交专利认可的机构进行保藏，其微生物保藏编号为：CGMCCNo.13458；分类命名为：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心(国家专利局指定专利微生物保藏中心)保藏；保藏时间：2017年9月25日；保藏地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

本申请所分离的植物乳杆菌菌株(Lactobacillus plantarum LP6)具有如下生物学特性：菌种为革兰氏样性菌，呈直杆状，单个、有时成对或成链状。MRS固体培养基上菌落直径1-3mm，乳白色，凸起，呈圆形，表面光滑。最适生长温度为30～37℃，厌氧或兼性厌氧，最适pH 6.5左右，在MRS液体培养基中生长浑浊。

本申请还提供一种乳酸菌共价包埋方法，所述方法包括：

步骤1，将所述乳酸菌菌体与水、小分子糖、酵母粉混合；

步骤2，将步骤1制备的体系与抗氧化剂混合；

步骤3，将步骤2制备的体系与多孔淀粉混合；

步骤4，将步骤3制备的体系与蛋白质混合，调节体系pH，恒温处理；

步骤5，将步骤4制备的体系与共价交联包埋剂混合，所述共价交联包埋剂为包括0.5wt％～1wt％凝乳酶以及0.3wt％～1.0wt％谷丙酰胺转氨酶的水溶液。

可选地，所述方法在步骤5之后还包括：